甲状腺癌的发生率女性明显高于男性，而在甲状腺的良恶性肿瘤组织中检测到雌激素受体（Estrogen Recptor，ER）mRNA和蛋白，这进一步支持雌激素可能直接作用于甲状腺组织及其肿瘤。研究三苯氧胺（Tamoxifen，TAM）对甲状腺癌治疗的设想源于甲状腺组织中ER的增高，然而近年来TAM的作用机制已经不局限于ER阳性的组织，临床上可见到TAM对部分ER阴性的乳腺癌仍然有一定疗效，这是通过非ER依赖的途径诱导乳腺癌细胞的凋亡实现的，并且TAM对其它ER阴性的恶性肿瘤如黑色素瘤、肝癌或脑膜瘤等也有抑制作用。本研究通过检测甲状腺癌组织中ER表达，显示甲状腺癌肿瘤组织中ER表达增高；通过雌激素对ER阳性甲状腺癌细胞体外作用的研究，证实雌激素促进ER阳性的甲状腺乳头状癌细胞生长，该效应被TAM抑制；TAM体内、体外均抑制ER阴性的甲状腺乳头状癌的生长，TAM可以抑制甲状腺癌细胞周期的进展和促进细胞凋亡；TAM通过上调Bax基因诱导甲状腺癌细胞凋亡，通过非ER途径发挥作用。1．甲状腺癌组织ER表达及其临床意义目的：研究甲状腺组织中ER的存在以及在不同疾病组织中的分布情况，分析ER在甲状腺疾病中的意义。方法：利用免疫组化方法测定人甲状腺组织标本包括甲状腺良性、恶性肿瘤组织、甲状腺良性病变组织中ER表达。实验标本来自南京医科大学第一附属医院内分泌外科，2002年3月-2003年3月手术病人。甲状腺疾病组织石蜡标本64例，10例瘤旁正常甲状腺组织，乳腺癌组织作为ER阳性对照。结果：阳性细胞内有棕红色颗粒分布，主要分布于细胞核内，部分位于细胞质内；阳性细胞数超过25％为阳性。10例正常甲状腺组织中1例ER阳性；64例甲状腺病变组织中ER阳性率43.8％（28／64）；其中甲状腺癌ER阳性率41.9％（13／31）；良、恶性肿瘤组织中ER阳性率48.7％，非肿瘤组织ER阳性率36.0％；与正常甲状腺组织相比显着增高（p＜0.05）。甲状腺原发性癌组织中ER阳性率为50％（11／22），颈部或其它部位转移性癌组织中ER阳性率为11.1％（1／9）例，转移性癌组织ER表达率明显降低（P＜0.05）；雌激素的表达与性别、年龄无明显关系。结论：甲状腺肿瘤组织内ER表达增高，提示甲状腺肿瘤的发生发展可能与雌激素有关。二、三苯氧胺抑制ER阳性甲状腺乳头状癌细胞生长目的：探讨雌激素对ER阳性的甲状腺癌细胞生长的影响，以及TAM对甲状腺癌细胞的作用，并初步探讨其作用机制。方法：采用原代细胞培养获得甲状腺乳头状癌细胞，用10^-11、10^-10、10^-9、10^-8、10^-7 mol／Lβ-雌二醇和10^-10、10^-9、10^-8、10^-7、10^-6 mol／LTAM分别作用1、3、5、7d，4-甲基偶氮四唑蓝（MTT）法观察甲状腺癌细胞增殖情况，流式细胞仪（FCM）观察细胞周期和凋亡，分析β-雌二醇、TAM对甲状腺癌细胞周期的影响；半定量RT-PCR法测定β-雌二醇、TAM对甲状腺癌细胞Cyclin D₁ mRNA表达的影响。结果：β-雌二醇刺激甲状腺乳头状癌细胞的增殖，并具有时间和浓度依赖性（P＜0.05），该效应被TAM抑制；β-雌二醇刺激甲状腺癌细胞后G₀／G₁细胞的比例减少，S期细胞增加（P＜0.05），Cyclin D₁ mRNA的表达升高（P＜0.05）；而TAM则可以逆转该效应。结论：雌二醇促进甲状腺癌细胞从G₁期向S期的转化而促进甲状腺癌细胞生长；TAM能逆转雌二醇促进甲状腺癌细胞生长作用，因而TAM可能通过经典ER通路发挥作用。三、TAM抑制ER阴性的甲状腺癌生长目的：研究TAM对ER阴性的甲状腺乳头状癌和滤泡状癌的体内外作用，并初步探索其作用机制。方法：（1）体外实验：10、8、6、4、2、0μmol／LTAM刺激甲状腺乳头状癌细胞（IHH-4）和甲状腺滤泡状癌细胞（FTC3-133）24、48、72h，4-甲基偶氮四唑蓝（MTT）细胞增殖，流式细胞仪（FCM）DNA定量法观察8μmol／L TAM作用24 h后甲状腺癌细胞周期的变化和凋亡的发生；免疫组织化学法和RT-PCR的方法检测两株细胞中ER的表达。（2）体内实验：5周龄BALB／c雌性裸鼠皮下接种甲状腺乳头状癌细胞IHH-4，一周后肿瘤生长，处理组予TAM 5mg／kg／d灌胃，对照组予等体积安慰剂，连续5周观察肿瘤体积和小鼠体重变化，5周后处死小鼠，比较两组间肿瘤的体积和重量。结果：（1）体外实验：免疫组化法和RT-PCR法检测IHH-4和FTC-133细胞中ER均为阴性；TAM明显抑制两株ER阴性甲状腺癌细胞增殖，呈时间和剂量依赖性；TAM使两株甲状腺癌细胞阻滞于G₁期，并且诱导FTC3-133细胞的凋亡。（2）体内实验：IHH-4细胞接种裸鼠皮下，一周后移植瘤长成，平均长径0.65cm；TAM作用5周后种植瘤体积和重量均受到抑制，与对照组比较有显着性差异（P＜0.05）。结论：TAM抑制ER阴性甲状腺癌生长，并通过非依赖ER途径发挥作用。四、TAM上调Bax表达诱导ER阴性甲状腺癌细胞凋亡目的：TAM抑制ER阳性细胞生长，同时对ER阴性细胞生长有一定的抑制作用。本实验研究TAM对滤泡性甲状腺癌FTC-133生长的影响，并进一步研究其作用机制。方法：将滤泡型甲状腺癌细胞FTC-133分别与0、2、4、6、8、10μmol／L的TAM共培养24、48、72 h后，4-甲基偶氮四唑蓝（MTT）细胞增殖试验检测TAM对甲状腺癌生长的影响；将FTC-133与0、6、10μmol／L TAM共培养，24 h后流式细胞仪ANNEXIN-V／PI法观察TAM对滤泡性甲状腺癌FTC-133凋亡的影响。荧光定量PCR和Western blot的方法观察8μmol／L TAM作用后FTC-133细胞Bax和Bcl-2基因表达的变化。结果：TAM抑制甲状腺癌细胞FTC-133细胞的增殖，并呈现时间和剂量依赖性。TAM可以诱导FTC-133细胞凋亡；TAM作用后FTC-133细胞Bax基因表达升高，而Bcl-2基因的表达无明显变化；FTC-133细胞不表达ER。结论：TAM通过上调Bax基因的表达诱导甲状腺癌FTC-133细胞凋亡；TAM通过非ER依赖的途径而发挥作用。