微卫星标记技术定性、定量鉴定动物源性成分的应用研究

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商品中动物源成分的掺假、冒充、瞒报等关系食品安全的事件屡禁不止,损害着消费者的权益,影响着市场秩序。疯牛病的爆发,让人们开始重新思考饲料中添加动物源成分的可行性。因此,商品之中动物源成分的鉴定显得越来越重要。随着分子生物学技术的发展,微卫星DNA已被深入了解,微卫星DNA遵循孟德尔遗传定律,可以稳定遗传,被广泛应用于群体遗传研究,但是关于应用微卫星标记技术鉴别肉品的研究还鲜有报道。运用微卫星标记技术建立一种快速、有效的动物源成分的检测方法,确定动物成分的物种,能帮助质检人员提高工作效率降低成本,快速控制动物源性商品的随意流通,扩大食品安全控制范围,满足市场发展的检测需要。本试验应用微卫星标记技术鉴别商品中常见的动物源性成分。采集市场上常见的猪、牛、绵羊、山羊、鸭、鹅、鸡、狗为试验对象,从Gnenbank中初选出鸭、猪、牛、绵羊四种动物的微卫星标记,通过对微卫星标记的序列设计引物,然后进行PCR-凝胶电泳,筛选出每种动物具有种内通用、种间特异的微卫星标记用以鉴定。试验结果表明:在猪、牛、绵羊、山羊、鸭、鹅、鸡、狗的动物源性成分中鉴定鸭源性成分采用鸭的特异性微卫星标记AJ272583,扩增的目的片段为267bp;鉴定牛源性成分采用牛的特异性微卫星标记AB463,扩增的目的片段为178bp;鉴定绵羊源性成分采用牛的绵羊的特异性卫星标记x89268,扩增的目的片段为207bp;鉴定猪源性成分采用猪的特异性微卫星标记EF046,扩增的目的片段为212bp。分别应用鸭的微卫星标记AJ272583、牛的微卫星标记AB463、绵羊卫星标记x89268、猪的微卫星标记EF046进行荧光定量PCR,得到鸭源性成分肉的百分含量公式为C=10[(Ct-17.77)/-3.3844]×100%;牛源性成分肉的百分的含量的公式为C=10[(Ct-16.895)/-3.3844]×100%;绵羊源性成分肉的百分的含量的公式为C=10[(Ct-18.639)/-3.3844]×100%;猪源性成分肉的百分的含量的公式为C=10[(Ct-19.389)/-3.1439]×100%.实时荧光PCR法能够对混合肉品中鸭、牛、绵羊、猪源性成分进行快速准确地定性、定量分析,可以作为市场监督和检验鉴定的可行性方法。
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