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研究背景肝脏移植是目前治疗终末期肝病最有效方法。术后的免疫排斥反应影响了患者的长期生存。目前排斥反应治疗多依赖免疫抑制剂,但其治疗浓度和毒副作用浓度之间的差距较小,及时检测药物浓度和及时发现排斥反应非常重要。淋巴细胞介导的排斥反应在肝移植排斥反应中占有重要的地位。而淋巴细胞亚群在移植排斥反应中的研究较少且结果不尽相同,其在临床肝移植中的变化及指导意义目前尚不清楚。研究目的本研究拟通过分析我院临床肝移植受者外周血白细胞的变化,探索淋巴细胞亚群与排斥反应的关系,为排斥反应的监测、免疫抑制治疗提供理论依据。方法收集郑州市人民医院2011年1月到2013年3月肝移植患者的临床资料,其中排斥反应12例,随机抽取26例稳定受者为对照组。供体获取采用快速多器官获取法,UW液保存。17例受者采用背驮式肝移植,21受者采用经典式肝移植。术后应用他克莫司(FK506)、麦考酚钠(米芙,MPA)和泼尼松(Pre)的三联免疫抑制治疗,头孢匹罗和替考拉宁抗感染治疗。采用流式细胞术分析外周血中的T细胞亚群、NK细胞及B细胞的变化。采用CD45区分淋巴细胞,CD3分出T细胞,CD4或CD8区分出CD4或CD8T细胞；采用CD16+CD56区分NK细胞,CD19区分B细胞。肝组织采用HE染色：福尔马林固定、包埋、脱蜡、染色、脱水、透明和封片,使用Olympus PM-6显微镜照相。急性排斥反应诊断按Banff标准进行。数据以均数±标准误(x±SE)表示,组间比较用SPSS17.0软件包进行,P<0.05为差异有显著性。结果(1)手术后三周内发生排斥反应12例,其中轻中度排斥反应5例,重度排斥反应7例。(2)肝移植排斥组与稳定组的热缺血时间、无肝期、受体的手术时间、感染率和FK506的谷值浓度比较无统计学差异(P>0.05)。(3)稳定组的ALT和AST术后迅速升高,一周后逐渐降低恢复到接近正常状态,而ALP和GGT术后增高不明显,一周后渐升高,胆红素术后渐降低；而排斥组术后3周内转氨酶及胆红素出现再次升高,与稳定组比较具有统计学差异(P<0.05)。(4)肝移植术后三周内各时间点稳定组和排斥组白细胞无统计学差异(P>0.05)。(5)肝移植术后三周内同时间点排斥组CD4细胞占T细胞的百分率明显高于稳定组(P<0.05)、CD4/CD8比值明显高于稳定组(P<0.05)。(6)肝移植术后排斥组与稳定组T、NK和B细胞的比例无统计学差异(P>0.05)。(7)肝移植术后排斥组与稳定组白细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞计数无统计学差异(P>0.05),但淋巴细胞总数排斥组高于稳定组(P<0.05)。结论(1)肝移植受者术后三周内发生排斥反应时,外周血淋巴细胞和CD4细胞比率升高,淋巴细胞和CD4细胞是肝移植排斥反应的有效监测指标。(2)肝移植术后三周内受者外周血CD4/CD8比值升高达2.61时提示有可能发生排斥反应。