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希瓦氏菌(Shewanella)是革兰氏阴性菌,运动杆菌,广泛分布于环境中,特别是水产动物及富含蛋白的食品中。波罗的海希瓦氏菌(S.baltica)和腐败希瓦氏菌(S.putrefaciens)在水产品腐败中占有主导作用[1,2]。为了研究壳聚糖对希瓦氏菌生物被膜的影响,研究采用微孔板定量检测法、胞外多糖测定、细菌计数法和扫描电镜观测等方法,分析了体外培养希瓦氏菌生物被膜形成特性和壳聚糖抗生物被膜的作用。研究主要结果如下：以波罗的海希瓦氏菌S.baltica和腐败希瓦氏菌S.putrefaciens为研究对象,分析两株细菌体外培养条件下生物被膜形成的特性。结果发现,菌株种类、培养基的选择、外源葡萄糖、氯化钠、pH值、黏附材料等因素都会影响生物被膜的形成。相对于S.putrefaciens, S.baltica生物被膜形成能力更高,在TSB、LB、TYE三种培养基中TSB肉汤中更利于生物被膜形成；0.5～0.75%浓度的葡萄糖促进生物被膜的形成,而对细菌生长无显著影响；低浓度的NaCl有利于希瓦氏菌生物被膜产生,其中2.0%NaCl添加时希瓦氏菌形成生物被膜最高；相对于玻璃片,希瓦氏菌中更容易在不锈钢片上形成生物被膜。希瓦氏菌在25℃TSB中培养2d可形成成熟生物被膜。选择S.baltica作为研究对象,探讨壳聚糖对希瓦氏菌生物被摸形成的影响。研究可溶性壳聚糖对S.baltica的生物被膜抑制作用,结果发现壳聚糖对S.baltica的MIC和MIBC分别为0.25mg/mL和0.02mg/mL,经1/2MIC、1/4MIC和1/8MIC的壳聚糖溶液处理后,细菌黏附的抑制率分别达到73.69%、46.29%和12.44%；在S.baltica培养的第2d,生物被膜含量减少56.12%、18.7%和9.37%,菌体的代谢活性抑制率为25.95%、20.2%和9.08%,胞外多糖(EPS)抑制率为57.77%、48.36%和22.05%。亚抑菌浓度的壳聚糖能够明显抑制生物被膜形成,降低被膜菌的代谢活性。经1/2MIC,1/4MIC和1/8MIC的壳聚糖结合茶多酚溶液处理后,玻璃片上细菌黏附的抑制率90.25%、61.97和26.73%,在培养第2d生物被膜含量减少63.94%、34.95%和19.31%,菌体的代谢活性抑制率为36.49%、30.73%和15.76%,壳聚糖复合亚抑菌浓度茶多酚能显著增强壳聚糖单独使用时对S.baltica形成生物被膜的抑制作用。电子扫描显微镜(SEM)观察进一步证实了上诉实验结果。分析了壳聚糖对S.baltica成熟生物被膜的清除作用。随着壳聚糖处理浓度的增加和处理时间的延长,壳聚糖对其成熟生物被膜的清除显著增强。经1/2MIC、MIC、2MIC和4MIC壳聚糖中孵育2h时,菌体的代谢活性减少率分别是24.74%、55.16%、68.09%和85.83%。4MIC壳聚糖中孵育2h时,细菌抑制率高达79.47%,EPS减少率超过90%。高浓度壳聚糖能够有效清除成熟生物被膜,电子扫描显微镜(SEM)下观察到成熟生物被膜受到了严重的破坏,胞外分泌物大量减少,被膜菌菌体的形态出现凹陷、扭曲和变形,抑菌效果明显。同时壳聚糖结合茶多酚使用增强了对成熟被膜的清除作用,壳聚糖和茶多酚在1/2MIC、MIC、2MIC和4MIC(Ch+TP)对希瓦氏菌在TSB溶液中成熟生物被膜被膜菌的杀菌率分别是23.47%、31.84%、71.25%、84.72%,EPS减少率分别是23.71%、62.18%、73.95%、81.36%。表明两者存在协同作用,效果比单独使用壳聚糖要显著。上述结果表明,体外培养S.baltica和S.putrefaciens形成生物被膜受到环境条件的影响,S.baltica更易形成生物被膜。壳聚糖对S.baltica有较强的抗菌活性,可有效抑制生物被膜的形成和清除成熟的生物被膜,壳聚糖结合茶多酚使用在抗生物被膜作用方面,具有协同作用。