基于胶体金和量子点免疫层析技术的研究及应用

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免疫层析技术因其简单快速、低成本、适合现场快速筛选,已成为食品安全中的重要检测手段。本文制备了胶体金和量子点两种探针作为标记物,偶联抗体,分别研制了呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷酮(AMOZ)胶体金免疫层析试剂条、三聚氰胺胶体金免疫层析试剂条、三聚氰胺量子点免疫层析试剂条,并对试剂条性能进行了研究。主要内容有以下几个部分:1.制备直径18nm左右的胶体金颗粒,将其作为标记探针,偶联AMOZ单克隆抗体。分别将包被抗原和兔抗鼠IgG在硝酸纤维素膜(NC)上划线作为检测线(T线)和质控线(C线),制成免疫层析试剂条。AMOZ免疫层析试剂条的检测限为10ng/mL,10min左右显示结果。对饲料、肉类样品进行加标,分别用胶体金免疫层析试剂条与酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测,结果一致。2.将胶体金作为探针标记三聚氰胺单克隆抗体,采用类似方法制备出三聚氰胺免疫层析试剂条,试剂条的检测限为10ng/mL,10min左右显示结果,试剂条密封放置在4℃150天后取出检测,检测效果无明显改变。对牛奶等样品进行加标,分别用胶体金免疫层析试剂条与ELISA检测,结果吻合。3.将巯基丙酸(MPA)作为稳定剂,制备水溶性CdTe量子点(QDs)。对其进行包壳,得到核壳结构的CdTe/ZnS QDs。将此QDs纯化后,与三聚氰胺抗体偶联,制备了量子点-抗体(QDs-Ab)复合物,优化复合物条件,制备量子点免疫层析试剂条,试剂条检测限与三聚氰胺胶体金免疫层析试剂条结果一致,与10种物质进行交叉反应实验,特异性良好。对牛奶等样品进行加标处理,用量子点免疫层析试剂条和ELISA检测对比,两者结果基本一致,相关性很好。免疫层析技术因其简单、方便、快速、可在线检测样品,成为一种有效的检测手段。本论文中,一方面,我们制备了胶体金纳米颗粒并建立了检测食品和饲料中AMOZ和三聚氰胺的免疫层析分析法,检测的灵敏度较高;另一方面,我们成功制备CdTe/ZnS量子点并将其与三聚氰胺抗体交联,建立了高灵敏检测三聚氰胺的以量子点探针为基础的免疫层析分析法。这种新的免疫层析分析法可推广至食品分析中其它物质的检测。
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