论文部分内容阅读
目的:慢性胃炎（Chronic Gastritis,CG）系指多种病因引起的慢性胃粘膜炎症病变。患者早期无明显萎缩、肠化,但伴有明显腹痛、腹胀症状。是人类最常见的持续性和隐匿性的疾病之一,严重影响患者的工作、生活。幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori,HP）是一种微需氧的革兰阴性螺旋杆菌,细胞毒相关基因A抗原（Cag A）是其主要的毒力因子。研究发现Cag A阳性的HP对胃黏膜损伤更为严重。我们前期实验研究发现与HP感染的无症状患者相比,HP感染的慢性胃炎患者胃黏膜的Cag A阳性率明显增高。这一结果提示HP感染后可能通过Cag A影响慢性胃炎患者的症状及疾病发展。慢性胃炎患者常伴有明显腹痛、腹胀,众所周知,人体内很多神经递质及内分泌激素均可能参与上述症状的调控。临床研究发现慢性胃炎患者胃黏膜5-羟色胺（5-HT）和5-羟色胺受体（5-HTR）m RNA的表达较正常人明显增加,其中5-HTR1、5-HTR3、5-HTR4均参与内脏感觉过敏调控。NF-k B（P65）被认为是胃发生病理生理改变的重要介质。研究发现NF-k B激活后不仅影响细胞因子释放,甚至可能引起体内激素变化。在肠嗜硌细胞瘤的研究中也证实P65激活可以促进5-HT释放增加。因此本研究旨在探讨HP释放的Cag A毒力因子通过活化NF-k B（P65）信号通路影响胃肠道功能调控相关的5-HT受体的表达,进而参与介导慢性胃炎患者腹痛、腹胀症状产生的机制。为临床治疗CG提出新的治疗方向及靶点。方法:（1）招募HP感染的慢性胃炎患者和健康体检者,内镜下取胃粘膜组织（注:本研究已通过伦理审批,并取得患者知情同意）;（2）从组织水平验证:采用免疫组织化学法及Western-blot法检测比较CG-HP+Cag A+组和健康对照组的胃粘膜组织中5-HTR1、5-HTR3、5-HTR4、Cag A及磷酸化的NF-k B（p-P65）的蛋白表达变化;（3）从细胞水平验证:筛选出Cag A表达低的胃癌细胞,将Pc DNA3.1-Cag A真核表达质粒及对照组Pc DNA3.1-NC转染入Cag A表达低的胃癌细胞,采用Western-blot法检测比较5-HTR1、5HTR3、5-HTR4、p-P65的表达差异。结果:（1）免疫组织化学结果显示5-HTR3、5-HTR4、p-P65在CG-Hp（+）Cag A（+）胃粘膜中的表达较正常胃粘膜组织明显增加,差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）Western-blot法检测发现与健康对照组相比,CG-HP（+）Cag A（+）患者胃粘膜组织中5-HTR3、5-HTR4、Cag A及p-P65的蛋白表达明显增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。（3）细胞实验结果显示MKN28胃癌细胞系Pc DNA3.1-Cag A组较Pc DNA3.1-NC组5-HTR3、5-HTR4及p-P65的蛋白表达明显增高,其中Pc DNA3.1-Cag A组flag阳性表达（证实成功构建了Cag A过表达）。结论:HP释放的Cag A毒力因子可能通过活化NF-k B（P65）信号通路影响胃肠道功能调控相关的5-HTR3、5-HTR4的表达,进而参与介导慢性胃炎患者消化道相关症状的产生。