【摘 要】
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【目的】检测多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓中蛋白酶Nexin-1(PN1)的表达,确定PN1蛋白对MM细胞系凋亡的影响,检测PN1和硼替佐米分别以及联合处理对MM细胞凋亡抑制蛋白XIAP及NF-κB
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【目的】检测多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓中蛋白酶Nexin-1(PN1)的表达,确定PN1蛋白对MM细胞系凋亡的影响,检测PN1和硼替佐米分别以及联合处理对MM细胞凋亡抑制蛋白XIAP及NF-κB通路的影响,进而探索PN1能否使MM细胞对硼替佐米的敏感性增强。【方法】用免疫组化检测多发性骨髓瘤及正常对照骨髓标本PN1的表达并评分;用Cell Counting Kit-8(CCK8)验证硼替佐米对MM细胞增殖的抑制作用,并检测最适作用浓度;通过电转或脂质体转染把PN1质粒和siRNA整合入MM细胞中;用Annexin V-PI双标记后用流式细胞仪检测PN1和硼替佐米分别及联合处理后MM细胞的凋亡情况;用实时定量荧光PCR和免疫印迹实验检测PN1和硼替佐米分别以及联合处理对MM细胞中XIAP表达和NF-κB通路的影响,以探索细胞对硼替佐米敏感性的变化及其机制。【结果】PN1在多发性骨髓瘤病人骨髓中的表达水平显著低于正常对照骨髓组织;上调PN1表达后MM细胞凋亡增加,XIAP表达水平降低,下调PN1表达则结果相反;用硼替佐米处理MM细胞后,NF-κB通路被抑制,XIAP和磷酸化XIAP(p-XIAP)表达却升高;而与硼替佐米单独作用组相比,联合PN1过表达处理可下调MM细胞中XIAP和p-XIAP的表达,且协同抑制NF-κB通路,使细胞凋亡增多。【结论】在MM细胞中,PN1可协同硼替佐米抑制NF-κB通路活化,并降低由硼替佐米诱导的XIAP和p-XIAP表达,从而增加MM细胞对硼替佐米的敏感性。
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