论文部分内容阅读
禽网状内皮组织增殖病(reticuloendotheliosis, RE)是继鸡马立克氏病、鸡淋巴细胞白血病之后的第三种病毒性肿瘤病。微卫星不稳定性(microsatellite instability, MSI)广泛地应用于人类肿瘤病的检测。目前未见有应用微卫星技术研究禽网状内皮组织增殖病病毒(reticuloendotheliosis virus, REV)感染鸡胚成纤维细胞后引起宿主基因组变化的报道。本试验将REV感染鸡胚成纤维细胞后,检测鸡染色体上微卫星不稳定性,旨在发现禽网状内皮组织增殖病病毒感染鸡胚成纤维细胞后是否引起宿主基因组的改变,为此病的早期诊断及肿瘤的分子发病机制提供线索。本试验中应用22个SPF鸡胚培养鸡胚成纤维细胞,将每个鸡胚的细胞分成两部分,一半细胞接种REV,另一半作为对照,获得含试验和对照的22组样本,提取细胞的基因组DNA。选取鸡1、2、3号染色体上135个微卫星标记,分别采用聚合酶链式反应、12%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染等技术检测基因组微卫星不稳定性。试验结果统计显示135个微卫星标记,有106个位点发生不同百分率的MSI,占全部微卫星标记的78.52%。其中ABR0139变化率为50.00%。变化率在30%以上的位点共有16个。这16个位点中位于1号染色体上的位点有8个,分别是ABR0139、ABR0172. MCW0036、ABR0504、ABR0528、ABR1328、MCW0167、ABR0368;位于2号染色体上的位点有7个,分别是ABR0404、ABR0197、ABR0599、ABR0107、ABR0004、 ABR0067、ADL0300;位于3号染色体上的位点有1个,分别是ABR0350。另外有29个标记用12%聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法没有检测到变化。22组鸡胚成纤维细胞感染REV后全部表现出MSI。3号样品,MSI发生率最高为40.00%,其次1号样品MSI发生率为25.19%。其余样品的MSI变化率均在在25%以下。其中,MSI变化率在20-25%的样品有2号、13号,共2组样品；变化率在10%-20%的样品有4号、5号、6号、7号、8号、9号、10号、11号、12号、16号、18号、20号、21号,共13组样品；余下5组样品MSI变化率在10%以下。本试验首次发现禽网状内皮组织增殖病病毒感染鸡胚成纤维细胞1、2、3号染色体上发生微卫星不稳定性,这可能为网状内皮组织增殖病的致病机理和早期诊断提供参考。