长座虫草子实体的人工诱发及其成分分析

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泛义的虫草属真菌是一大类昆虫病原真菌,主要寄生于昆虫、蜘蛛和某些大团囊菌的某些地下种类的子实体上,利用寄主的营养完成其生活史。虫草类真菌含有多种生理活性物质,具有多种生理功能,在医药、农业、食品工业及现代技术应用中具有广泛的应用价值。虽然我国虫草资源丰富,但是目前所研究的具有开发价值的虫草种类很少,因此,开发新的虫草资源是解决食药用虫草资源匮乏的有效途径之一。长座虫草是寄生于同翅目蝉若虫上的一种重要的虫生真菌,其无性型为长座被毛孢。目前关于长座虫草的研究报道很少,本文对长座虫草进行了一系列研究,包括子实体的人工培养、人工培养物的主要有效成分分析、挥发性成分分析及急性毒理实验,为将来大规模开发利用长座虫草提供了重要的科学依据。对长座虫草子实体的培养条件进行了深一步探索,确立了最佳的培养工艺:长座被毛孢液体摇瓶最佳培养时间为9d,以小麦片为基质,子实体栽培营养液Ⅰ中添加10%的动物性蛋白(黄粉虫粉)作为营养液,pH6.0,按照每瓶20g小麦片、40mL营养液的量配制子实体栽培培养基;接种量为9mL/瓶,接种后置于25℃人工气候箱中,菌丝体生长初期完全避光,菌丝长满后(约10d)给予1~200lux连续光照,待子实体生长健壮几乎不再生长时采收。对长座虫草三种人工培养物-固体平板培养菌丝体、孢梗束和子实体的主要有效成分进行分析,结果表明,几种人工培养物中相关成分的含量差异显著。此结果与野生冬虫夏草相比,三种人工培养物中氨基酸总量与必须氨基酸的含量、肌苷、胞苷、无机元素Mg和Se的含量均显著高于野生冬虫夏草,有害元素Pb、Hg的含量显著低于野生冬虫夏草。采用同时蒸馏萃取法对长座虫草两种人工培养物-菌丝体和子实体(混有孢梗束)的挥发性成分进行了提取,经GC-MS分析,分别鉴定出20种和6种挥发性成分。长座虫草菌丝体中的挥发性物质主要有酮类、醇类、烷烃类、烯烃类、醚类、酚类;子实体中所含有的挥发性物质主要为醇类、醛类和酚类。共有成分1-辛烯-3-醇、2,6-二叔丁基对甲苯酚在菌丝体中占51.66%,在子实体中占90.30%。对长座虫草子实体的安全性作了初步评价。急性毒理实验表明,长座虫草子实体(混有孢梗束)未产生明显的急性毒性作用。长座虫草子实体对昆明小鼠的经口急性毒性剂量大于7.20g/kg BW。在上述试验的基础上对长座虫草子实体的人工诱发培养申请了专利,为将来长座虫草的综合开发和工厂化生产奠定了基础并提供了技术保障。
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