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目的肝硬化(Liver cirrhosis,LC)是临床上常见的一种消化系统功能疾病,属于由不同病因所导致出现的肝脏慢性、进行性、弥漫性病变的一种类型,近年来研究发现其发病率呈上升趋势,但早期一般处于无明显临床症状的代偿期,不易被查出,使患者错过最佳诊断时机。近年来研究发现,高尔基体蛋白73(Golgi protein73,GP73)主要表达于人类多种组织的上皮细胞,在正常的肝脏中,基本不表达,但在肝硬化组织中呈高表达,是一种独立的肝硬化诊断指标。其在疾病诊断敏感度远高于AFP,作为一种潜在的新型肿瘤标志物,已越来越被人们所关注。肝硬化有向肝癌发展的可能性,因此若能及时诊断肝硬化,无疑对肝癌的防治也起到一定的作用。但目前GP73尚缺乏自动化的检测技术,无法应对大规模体检的临床需求。因此,能够更加快捷、准确的检测出血清GP73结果,显得尤为重要。方法1.本论文在ACL2800全自动化学发光测定仪上进行反应,分别利用生物素(Biotin)标记一种GP73单克隆抗体8E7,以吖啶脂(Acridinium ester,AE)标记另一种GP73单克隆抗体5A10,将标记的两种单克隆抗体与GP73抗原形成双抗体夹心复合物,再与链霉亲和素(streptavidin)修饰的磁珠结合,清洗后分别加入酸(HNO3+H2O2)、碱(NaOH)溶液后检测瞬时化学发光值。实验确定了该方法中各种试剂的最佳工作浓度及反应条件,并对此方法学进行了临床评估。2.分别检测160例肝硬化患者及50例健康体检者血清中GP73含量,用ROC曲线分析其诊断敏感度和特异性;并将肝硬化患者进行Child-Pugh分级,同时检测其凝血酶原时间(Prothrombin time,PT)、白蛋白(Albumin,ALB)、血清胆碱酯酶(Cholinesterase,CHE)、及总胆红素(Total bilirubin,TBIL)水平,分析各级患者上述指标与GP73之间的相关性。结果1.成功建立了自动化磁酶免GP73化学发光检测方法,该方法的检测灵敏度为1.19 ng/mL,检测范围为1.34～684.38 ng/mL,精密度分析得到的批内变异系数(Coefficient of Variation,CV)<2.69%,批间变异系数 CV<3.55%,回收率为93.46%～107.82%。该方法检测范围广,有较高的敏感度和特异性,能够满足临床对标本的检测要求。2.肝硬化患者血清GP73水平较正常对照组有明显提高(P<0.05),ROC曲线下面积为0.886,以124.5ng/mL作为cut-off值,GP73诊断肝硬化的灵敏度为78.05%,特异度为82.93%;肝硬化患者血清GP73水平在Child-Pugh分组间具有统计学差异(P<0.05)且与肝硬化指标CHE、ALB、TBIL、PT有相关性(r=-0.690,r=-0.428,r=0.672,r=0.575,P 均<0.001)。结论上述实验表明,本研究成功建立了 GP73的全自动磁酶免化学发光定量检测方法,为GP73的检测提供了新的参考,且建立的方法具有较高的灵敏度和特异性,检测性能均优于现有的酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),为今后体检人群的大规模筛查提供了便利工具。血清GP73水平随着肝硬化病情的进展显著上升,且与肝硬化指标有相关性,可作为肝硬化疾病诊断及病情监测的一项有效指标,联合检测GP73及CHE、ALB、TBIL、PT对于评估肝硬化的严重程度有一定价值。