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猪轮状病毒(Porcine rotavirus, PRV)隶属于呼肠孤病毒科,轮状病毒属,是引起仔猪病毒性腹泻的重要病原之一。该病主要感染幼畜,1日龄-10日龄仔猪感染后发病率可超过80%,死亡率高达50%-100%。主要症状为严重腹泻,部分病例因严重脱水、酸碱平衡失调并且继发感染而死亡,尤其是与猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻并发感染时,死亡率极高。该病在世界范围内分布广泛,给世界各地的畜牧业造成了严重的损失。本研究以纯化的PRV病毒为免疫原,免疫8周龄BALB/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行细胞融合。通过间接ELISA方法筛选,采用有限稀释法对杂交瘤细胞进行筛选,通过3次亚克隆,获得了两株能稳定分泌抗PRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2B3和1C11,经抗体亚类鉴定二者均为IgM亚类。2B3的杂交瘤染色体平均数为97,1C11的平均染色体数为102。间接ELISA测定细胞培养上清效价分别为：2B3的上清效价为1：103,1c11的上清效价为1:102。Western-blot及间接免疫荧光鉴定结果显示这两株单抗均能特异性的识别PRV。且这两株单克隆抗体不与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪伪狂犬病病毒(PrV)发生交叉反应,显示其有良好的特异性。叠加ELISA试验结果表明两株单抗分别识别的是PRV-VP6蛋白上不同的抗原位点。实验结果表明所制备的两株稳定分泌抗PRV单克隆抗体的杂交瘤细胞,对PRV病原检测有良好的特异性,为PRV疫情监测和准确快速的病原诊断及鉴别诊断奠定了基础。以纯化的兔抗PRV抗血清作为包被抗体,以2B3杂交瘤细胞培养上清作为检测抗体,初步建立检测猪轮状病毒的双抗体夹心ELISA检测方法。经辛酸-饱和硫酸铵抗体纯化法纯化兔抗PRV抗血清,浓度为7.161mg/mL,经SDS-PAGE对纯化结果进行分析,纯化后的IgG重链和轻链区条带清晰明显。纯化的兔抗PRV抗血清和2B3杂交瘤细胞培养上清经矩阵法确定兔抗PRV抗血清的最佳包被浓度为(1：400),2B3细胞上清的最佳检测浓度为(1：100),应用所建立的双抗体夹心ELISA方法对PRV病毒的最低检出量为(8.4×104个TCID50),以OD490nm>0.1528作为阳性判定标准。经检测,与PEDV、TGEV、PrV均无交叉反应,重复性试验证明其具有良好的稳定性。通过对20份病料样品的检测,与RT-PCR方法相比较,符合率为95.7%。试验结果表明,所建立的双抗体夹心ELISA方法具有较好的特异性和敏感性,可用于PRV的快速检测。