【摘 要】
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目的:完成能够稳定表达CD20蛋白和能够稳定分泌抗CD20单克隆抗体细胞株的建立，为嵌合抗体制备的后续工作做准备。 方法和结果:提取Raji细胞RNA后以此为模板，通过基因工程的
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目的:完成能够稳定表达CD20蛋白和能够稳定分泌抗CD20单克隆抗体细胞株的建立，为嵌合抗体制备的后续工作做准备。 方法和结果:提取Raji细胞RNA后以此为模板，通过基因工程的方法构建重组表达质粒PET32a-CD20和重组表达质粒PCDNA3.1-CD20的相继构建以及测序;转染NIH3T3细胞后用WESTERN BLOT和细胞免疫荧光方法鉴定表达蛋白;大量提取细胞膜蛋白后进行动物免疫;用间接ELISA法测定血清效价后进行细胞融合及融合细胞的效价测定。 结论:PET32a-CD20和PCDNA3.1-CD20两种重组质粒在DH5α感受态细胞中高效表达且无突变基因存在;通过WESTERN BLOT和细胞免疫荧光鉴定证明经过质粒转染小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3得到了能够稳定表达CD20的细胞株。阳性转染细胞细胞膜大量提取过程中无过程流失;免疫的小鼠效价达到细胞融合要求;细胞融合成功且融合细胞效价达标。
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