【摘 要】
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目的:在课题组前期建立的冠心病痰瘀互结证大鼠模型的基础上,基于血清代谢组学技术,观察丹蒌片给药前后冠心病痰瘀互结证大鼠差异性小分子代谢物的变化,分析其相关代谢途径,并通过检测丹蒌片干预后模型大鼠血清和心肌组织的蛋白表达,对代谢组学预测的通路进行验证,旨在探讨丹蒌片治疗冠心病痰瘀互结证大鼠的作用机制。方法:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)对丹蒌片中的化学成分进行
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目的:在课题组前期建立的冠心病痰瘀互结证大鼠模型的基础上,基于血清代谢组学技术,观察丹蒌片给药前后冠心病痰瘀互结证大鼠差异性小分子代谢物的变化,分析其相关代谢途径,并通过检测丹蒌片干预后模型大鼠血清和心肌组织的蛋白表达,对代谢组学预测的通路进行验证,旨在探讨丹蒌片治疗冠心病痰瘀互结证大鼠的作用机制。方法:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)对丹蒌片中的化学成分进行定性分析。基于课题组前期建立的丹蒌片干预冠心病痰瘀互结证大鼠模型,运用血清代谢组学技术对冠心病痰瘀互结证大鼠的血清样本进行代谢轮廓分析,用主成分分析(PCA)和偏最小二乘判别分析(PLS-DA)检测丹蒌片给药前后冠心病痰瘀互结证大鼠的小分子代谢物的变化并分析其相关代谢途径。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清中氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量变化,蛋白免疫印迹法(Western-Blot)检测心肌组织中表皮生长因子受体(EGFR)的表达水平,对代谢组学预测的通路进行验证,从而探讨丹蒌片治疗冠心病痰瘀互结证大鼠的作用机制。结果:1.基于UPLC-Q-TOF/MS技术在本批次丹蒌片中共鉴定出45种化合物,包括25种黄酮类、7种丹参酮类、5种酚酸类、2种内酯类、4种三萜类和2种其他类化合物。2.丹蒌片对冠心病痰瘀互结证大鼠血清代谢物轮廓分布特征具有显著影响,丹蒌片共调节了有明显变化趋势的17个生物标记物,主要包括:甜菜碱、γ-亚麻酸、亚油酸、11,14,17-二十碳三烯酸、二十二碳六烯酸、LPC(16:1)、LPC(20:4)、LPC(22:6)、LPC(16:0)、LPC(18:1)、异丁酰肉碱、19-羟基脱氧皮质酮、L-氯化棕榈酰肉碱、精氨酸、5-羟基吲哚乙醛、L-辛酰基肉碱、5-羟基色胺。这17个生物标记物在甘油磷脂代谢、能量代谢、类固醇激素代谢以及氨基酸代谢等方面发挥重要作用。3.丹蒌片对冠心病痰瘀互结证大鼠血清ox-LDL、MDA、SOD含量变化和心肌组织EGFR表达有显著影响。与空白组和假手术组比较,模型组大鼠血清中ox-LDL、MDA含量显著上升(P<0.01),SOD含量明显下降(P<0.01),心肌组织中EGFR表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,丹蒌片低、中、高剂量组和阳性药组大鼠血清中ox-LDL和MDA含量均降低(P<0.01),SOD含量明显上升(P<0.01),大鼠心肌组织中EGFR表达明显降低(P<0.01)。结论:1.通过UPLC-Q-TOF/MS技术在丹蒌片中共鉴定出45种化合物,主要包括黄酮类、丹参酮类、酚酸类、内酯类、三萜类和其他等类型,基本明确了丹蒌片的化学组成,为后期进一步研究其药效物质基础提供了实验依据。2.丹蒌片对冠心病痰瘀互结证大鼠血清代谢物轮廓分布特征具有显著影响,共调节了有明显变化趋势的17个生物标记物,这些生物标记物主要在甘油磷脂代谢、能量代谢、类固醇激素代谢以及氨基酸代谢等方面发挥重要作用。3.丹蒌片治疗冠心病痰瘀互结证大鼠的作用机制可能是通过调节甘油磷脂代谢和能量代谢如溶血磷脂酰胆碱类物质(LPCs)、亚油酸、γ-亚麻酸来抑制EGFR和MMP9表达水平,影响炎性因子(TNF-α、IL-6)和氧化应激(ox-LDL、SOD、MDA)相关的效应指标的表达,从而发挥抗炎和抗氧化的作用。
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