无论是对于哺乳羔羊,还是以羊奶粉为营养的人类而言,山羊酪蛋白都是最关键的营养成分。另外,羊乳酪蛋白合成和分泌的水平,也是反映山羊乳腺上皮细胞生理功能状态的重要指标之一。因而,测定山羊酪蛋白,不仅对于准确评估山羊乳汁干物质含量、确定羊奶加工产品质量,而且对评估山羊乳腺生理状态、乳腺上皮细胞的鉴定和功能鉴定等都具有极其重要的理论和应用价值。以单克隆抗体为工具建立的蛋白质定性和定量测定技术是蛋白质测定中最常用、最普遍、最科学的技术,但这一技术的前提条件是必须研制出检测靶蛋白的单克隆抗体。本研究以山羊乳为材料,采用蛋白质分离技术对羊乳酪蛋白进行了分离,以纯化的酪蛋白为抗原,免疫6周龄BALB/c小鼠,建立酪蛋白抗体的ELISA测定技术,测定免疫小鼠的酪蛋白抗体效价,采用常规的单克隆抗体制备技术,用免疫小鼠脾细胞和SP2/0细胞制备筛选出分泌抗酪蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并对单克隆抗体按照常规要求指标进行鉴定,最后初步探讨研制的αs1酪蛋白单克隆抗体在一些检测技术中应用的可行性。研究获得如下结果:1.获得了纯化的山羊酪蛋白和相应的免疫血清。2.山羊酪蛋白优化包被浓度为10μg/mL,包被时间为4℃包被12h,免疫血清反应条件是37℃,60min,ELISA测定抗山羊酪蛋白抗体能够获得稳定结果。3.小鼠经过4次免疫后,免疫血清效价可以达到1:10~5。4.获得一株杂交瘤,命名为5B,其分泌的单克隆抗体特异性识别山羊酪蛋白。5.5B杂交瘤细胞培养上清效价为1:2~8,未纯化腹水效价为1:10~5。6.Western-blot结果显示单抗5B杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体特异性识别山羊αs1-酪蛋白。本研究成功获得了1株杂交瘤细胞,其分泌的单克隆抗体特异性识别羊乳αs1-酪蛋白。