【摘 要】
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多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)是骨髓中单一浆细胞异常增生所致的血液系统恶性肿瘤,主要表现为骨髓内单克隆浆细胞过度增生,产生大量单克隆免疫球蛋白,其发病机制尚不清楚且
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多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)是骨髓中单一浆细胞异常增生所致的血液系统恶性肿瘤,主要表现为骨髓内单克隆浆细胞过度增生,产生大量单克隆免疫球蛋白,其发病机制尚不清楚且缺乏有效的治疗手段。Clorf35是一个与MM恶性相关的基因,定位于1q42.13。前期研究发现,异位表达的Clorf35能促进NIH3T3细胞生长、增殖,促使细胞周期由G1期向S期转换;生物信息学分析提示Clorf35具有转录因子的基本结构;动物实验证实该基因可导致肿瘤的形成。在稳定表达的NIH3T3/Clorf35细胞中,c-myc基因mRNA及蛋白表达水平均明显增高。
为了进一步阐明Clorf35基因与MM发生发展的关系,揭示其可能参与的细胞信号转导途径,本课题采用RNAi技术特异性沉默Clorf35基因的表达,运用RT-PCR、Q-PCR及Western blotting等技术,检测干扰后细胞内Clorf35表达水平,获得干扰成功的细胞后,通过MTT法检测细胞增殖能力的变化。结果显示,将GV248-siRNA真核表达质粒转染NIH3T3/Clorf35细胞后,Clorf35基因mRNA及蛋白表达水平均下调(P<0.05);MTT结果表明,Clorf35基因表达被沉默后,细胞增殖能力明显降低。构建并包装纯化了慢病毒Clorf35/GV248-siRNA,并建立了稳定表达的NIH3T3/Clorf35-siRNA细胞,为进一步研究Clorf35在MM中的功能奠定了良好的基础。
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