Syk是一种蛋白酪氨酸激酶,由629个氨基酸所组成,主要参与机体内多种信号通路的信号传导。以往对于Syk的研究大多选取高等哺乳动物为实验对象,而到目前为止Syk在低等脊椎动物中的研究少之甚少,由于七鳃鳗不仅是现存的低等无颌类脊椎动物的重要代表,而且还是无脊椎动物向脊椎动物进化过程中具有承上启下意义的一个重要类群。因此,本文选取七鳃鳗这种无颌类脊椎动物为研究实验对象,探索Lja-Syk分子在七鳃鳗免疫应答过程中的作用。其目的在于既可以揭示Lja-Syk分子从低等到高等脊椎动物的分子进化进程,也进一步为深入了解无颌类脊椎动物免疫应答的分子机制奠定了实验基础。在本实验的研究基础之上,对Syk截短序列构建表达载体进行诱导表达,纯化后得到Lja-Syk的可溶性重组蛋白。随后以重组蛋白Lja-Syk为抗原,通过对新西兰兔(Oryctolagus cuniculus)进行皮下多点注射免疫,制备Lja-Syk的兔源多克隆抗体。通过ELISA方法检测分析,在第三次加强免疫后检测,抗体的效价能达到1:521 000。纯化后的抗体经免疫印迹实验检测其对Lja-Syk重组蛋白以及天然蛋白都有较强的特异性。为了进一步了解Lja-Syk的功能,我们通过利用反转录PCR以及免疫印迹等方法,在mRNA和蛋白水平上检测了Lja-Syk在免疫相关组织中随免疫应答时间变化的表达谱。反转录PCR和免疫印迹结果表明,混合菌和LPS刺激免疫后Lja-Syk在单个核白细胞以及髓样小体中均出现了明显上调的现象,说明Lja-Syk分子参与了七鳃鳗的免疫应答反应。由于VLRB~+淋巴细胞亚群在髓样小体中发育,所以我们推测Lja-Syk分子主要参与了与VLRB~+受体相关的免疫应答反应。利用siRNA干扰技术对Lja-Syk分子进行了七鳃鳗体内干扰敲低实验,结果表明所设计的3组siRNA混合物能在免疫激活七鳃鳗12 h时间点有效敲低Lja-Syk分子mRNA的转录以及蛋白的翻译,但36 h后阻遏作用有所降低,至48 h后基本恢复正常。此结果为后续深入探索Lja-Syk分子的功能奠定基础。