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目的:通过卵白蛋白(OVA)建立过敏性哮喘小鼠模型,观察加味过敏煎对哮喘小鼠CD4+T细胞亚群及其细胞因子的影响,以明确加味过敏煎抗敏平喘的免疫分子机制及作用靶点,填补了加味过敏煎治疗过敏性哮喘在基因水平的研究空白,为把加味过敏煎开发为新型、安全、有效的拮抗哮喘的药物提供实验基础,同时为临床使用该方治疗过敏性疾病提供科学可靠的实验依据。方法:将60只5周龄的BALB/c雌性小鼠随机分为6组(空白组,模型组,醋酸地塞米松阳性对照组,加味过敏煎低、中、高剂量组),每组10只。分致敏和激发2个阶段,致敏——实验开始当天,于实验第1、8、15天分别致敏,共3次,即除空白组外,其他各组小鼠均腹腔注射OVA致敏液(含20μg OVA+150μL氢氧化铝佐剂)0.2m L/只。空白组用磷酸盐缓冲液(PBS)代替OVA致敏液,方法同其余各组;激发——于实验第25-29天激发,连续5d,即除空白组外,其他各组小鼠置于自制的密闭玻璃容器中(25cm x 30cm x 40cm),以10g/L雾化吸入激发(雾化颗粒平均直径为3.7μm),20min/次,1次/d,以激发哮喘,在此期间,观察哮喘激发时小鼠的行为学表现。空白组采用PBS液代替OVA激发,方法同其余各组。药物干预:各组于实验第16-29天灌胃,加味过敏煎低、中、高剂量组给药剂量分别为13.6、27.2、54.4g·kg-1·d-1,地塞米松组给药剂量为1.25mg·kg-1·d-1,灌胃体积为20m L/kg,1次/日,连续14d。空白组和模型组给予等容积生理盐水。各组于末次激发24h后,取血清,运用ELISA法检测小鼠血清中Ig E、IFN-γ、IL-4、IL-17和IL-10等细胞因子的含量;取脾组织,采用流式细胞法检测其Th1/Th2/Th17/Treg等细胞亚群的比例变化;取肺组织,采用RT-PCR技术检测肺组织中Th1型细胞因子IFN-γ的m RNA表达水平,Th2型细胞因子IL-4的m RNA表达水平,Th17型细胞因子IL-17的m RNA表达水平,Treg型细胞因子IL-10的m RNA表达水平。结果:1.过敏性哮喘模型的建立:和空白组对比,模型组的行为学评分明显较高(P<0.01);和模型组对比,加味过敏煎组小鼠哮喘激发时的行为表现如喷嚏、呛咳、呼吸急促、腹肌收缩等症状显著减轻(P<0.01)。和空白组对比,模型组小鼠血清中OVA-s Ig E的浓度明显上升(P<0.01);和模型组对比,加味过敏煎低剂量组小鼠血清中OVA-s Ig E的含量具有下降的趋势,中、高剂量组均能明显降低小鼠血清中OVA-s Ig E的浓度(P<0.05~0.01)。2.加味过敏煎对哮喘小鼠CD4+T细胞亚群及其细胞因子影响的实验研究:ELISA实验结果显示:加味过敏煎能够显著减少哮喘小鼠血清中细胞因子IL-4和IL-17的表达水平(P<0.01),显著提高细胞因子IFN-γ和IL-10的表达水平(P<0.01)。流式细胞实验结果显示:加味过敏煎能显著减少OVA诱导的哮喘小鼠脾组织中Th2、Th17细胞的比例值(P<0.05~0.01),并能增加Th1、Treg细胞的比例值;显著升高Th1/Th2的比值,显著降低Th17/Treg的比值。RT-PCR实验结果显示:加味过敏煎能够明显的减少哮喘小鼠肺组织中Th2型细胞因子IL-4和Th17型细胞因子IL-17的m RNA的表达水平;同时,能够显著提高Th1型细胞因子IFN-γ的表达水平(P<0.01),明显提高Treg型细胞因子IL-10的m RNA的表达水平。结论:1.加味过敏煎具有治疗过敏性哮喘的药效作用。2.加味过敏煎治疗过敏性哮喘的机制可能是:(1)调控Th1/Th2细胞的分化:即可上调Th1细胞及其细胞因子IFN-γ的表达水平,下调Th2细胞及其细胞因子IL-4的表达水平;(2)调控Treg/Th17细胞的分化:即可上调Treg细胞及其细胞因子IL-10的表达和下调Th17细胞及其细胞因子IL-17的表达水平。