维甲酸类药物对NB4细胞作用的实时监测

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急性早幼粒白血病(APL)占成人急性髓性白血病(AML)的10%-15%,由于其起病急,病情进展迅速,克隆的白血病细胞在骨髓、外周血和其他造血组织中大量增生积聚,并浸润其他器官及组织,而使正常造血系统受到抑制,在早期会出现致命性出血、弥散性血管内凝血(DIC)而导致死亡而备受人们关注。因此快速、便捷、精确的白血病细胞的检测技术对白血病的早期诊断、药物治疗、治疗后的评估等具有十分重要的意义。研究表明全反式维甲酸(ATRA)对APL细胞有诱导其分化的功能,对急性早幼粒白血病有很好的治愈效果,完全缓解率能达到90%-95%。微流控芯片能够将生物、化学实验室的一般功能集成到一个很小的芯片上,由于其尺寸和细胞尺寸相当,并且可以可控的调节微流控内部的三维结构,形成相对独立的区域,从而使得细胞的培养、刺激、标记等过程可以系统化的实现,在细胞研究方面有着无可比拟的优势,在生物医学领域有很大的应用前景。本文旨在在微流控芯片内交联固定CD33抗体,利用抗原抗体作用来对急性早幼粒白血病细胞(NB4)进行捕获和检测,然后在微流控芯片中进行细胞培养,并用维甲酸药物对细胞进行刺激,实时监测药物对细胞的作用。其主要内容包括以下:1)先在金片表面用硫醇进行修饰,再与抗体共价交联结合,通过CD抗体与白血病细胞表面的抗原特异性作用,将白血病细胞捕获下来,并通过SPR成像技术来进行检测,最低检测限能达到61个细胞每毫升,而且在一定浓度范围内,检测信号与细胞浓度在一定范围内成对数线性关系。2)通过组装成一种简易的微流控芯片,建立芯片培养细胞的模型,通过芯片表面固定的抗体将白血病细胞NB4捕获在微流控芯片内,并在芯片内进行细胞培养,培养12h后,细胞的活力可以达到85%以上。然后在微流控芯片中利用全反式维甲酸对急性早幼粒白血病细胞进行刺激,并利用SPR来对维甲酸类药物对NB4作用进行实时监测,初步探讨对细胞作用的机制。
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