氟化氨银添加谷胱甘肽抑制早期牙骨质龋的实验研究

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目的探究氟化氨银(silver diamine fluoride,SDF)添加谷胱甘肽(glutathione,GSH)后对离体牙牙骨质的着色、抗酸性能的影响,对脱矿牙骨质再矿化作用的影响,以及对口腔黏膜是否有刺激作用,为临床上抑制早期牙骨质龋的发生及发展提供实验依据。方法1牙骨质着色实验:选取牙根面较为平整的离体牙,自釉牙骨质界下1mm进行冠根分离,制作30个牙骨质块,用5000目砂纸轻轻打磨牙骨质表面至光滑,而后随机分为3组(n=10),即SDF组、SDF添加GSH组和空白对照组,3组的牙骨质面分别涂SDF、SDF加GSH和去离子水。涂药后的牙骨质块置于人工唾液中,分别于1小时、1天、1周、1个月时用Crystaleye电脑比色仪检测并计算3组所有牙骨质试件的色差值ΔE。2牙骨质抗酸实验:选取离体牙,自釉牙骨质界下1mm进行冠根分离,用5000目砂纸打磨牙骨质面至光滑,制作30个牙骨质块后,每个牙骨质块保留3mm×3mm大小的实验开窗区,随机分3组(n=10),即SDF组、SDF添加GSH组和空白对照组,开窗区分别涂布SDF、SDF添加GSH和去离子水。将涂药后的3组牙骨质块分别浸泡在脱矿液中,于1天、1周、2周、3周、4周时各取1m L脱矿液,用乙二胺四乙酸(ethylenediamine tetraacetic acid,EDTA)络合滴定法来检测脱矿液中Ca2+浓度。3牙骨质再矿化实验:制作57个牙骨质试件,预留出3mm×3mm实验开窗区。将所有牙骨质试件置于脱矿液中,72小时后随机选取3个进行扫描电镜观察,确保成功制备出脱矿牙骨质模型,将剩余的54个牙骨质试件随机分为3组,实验开窗区分别涂布SDF、SDF添加GSH和去离子水,而后将3组牙骨质块分别置于缓冲液中,经过8天的p H循环后分别进行以下检测:(1)通过显微硬度仪检测每组样本的表面显微硬度值(n=6);(2)通过扫描电镜观察每组样本的表面超微形态(n=6);(3)通过X线能谱仪检测每组样本的表面钙磷比值(n=6)。4口腔黏膜刺激实验:将初成年的12只金黄地鼠随机分为A、B两组(n=6),A组金黄地鼠左侧颊黏膜缝合SDF添加GSH牙胶试件,右侧缝合去离子水牙胶试件;B组金黄地鼠左侧颊黏膜缝合SDF牙胶试件,右侧缝合SDF添加GSH牙胶试件。观察14后处死,肉眼观察试件周围黏膜组织情况并评分,取组织切片进行HE染色,使用光学显微镜进行组织学观察并评分。结果1电脑比色仪检测试件结果显示,在不同的时间点,SDF组与其他组测量值之间有显著差异(P<0.05),同一时间点三组的ΔE值由大到小分别是SDF组、SDF添加GSH组和空白对照组,SDF组ΔE值显著高于其他两组(P<0.05),SDF添加GSH组ΔE值略高于空白对照组(P<0.05)。SDF组ΔE值随着时间推进逐渐增加,SDF添加GSH组ΔE值随着时间推进略有增加,空白对照组在所有时间点的ΔE值几乎没有变化。2实验结果显示:不同时间、不同组溶出的钙离子浓度有显著性差异(P<0.05)。随着时间推移,每组脱矿液中钙离子的浓度随之增加,有显著性差异(P<0.05)。钙离子浓度在1天时最小,4周时最大。在每个时间点,SDF组和SDF添加GSH组溶出钙离子的浓度均显著低于空白对照组(P<0.05)。在1天、1周、2周时SDF添加GSH组脱矿液中钙离子的浓度略小于SDF组,而在3周、4周时SDF添加GSH组脱矿液中钙离子的浓度略大于SDF组,这种微小差异无统计学意义(P>0.05)。3 SDF和SDF添加GSH组的牙骨质表面显微硬度显著高于空白对照组(P<0.05),两组实验组牙骨质表面显微硬度的组间比较无显著性差异(P>0.05);脱矿牙骨质经SDF和SDF添加GSH处理后,用扫描电镜观察到牙骨质表面有再矿化物质沉积;SDF组和SDF添加GSH组的牙骨质表面钙磷比显著高于空白对照组(P<0.05),且接近正常羟基磷灰石的钙磷比,两组实验组牙骨质表面钙磷比的组间比较无显著性差异(P>0.05)。4肉眼观察A、B两组金黄地鼠左右侧颊黏膜,均无红班和焦痂形成。镜下观B组金黄地鼠左侧颊黏膜上皮完整,层次清晰,角化层有黑色颗粒浸润,基底层无明显炎细胞浸润、无水肿及血管充血等异常,A组左右侧颊黏膜与B组右侧颊黏膜上皮完整,层次清晰,基底层无明显炎细胞浸润、无水肿及血管充血等异常。结论SDF添加GSH可显著降低牙骨质的变黑着色,提高牙骨质在酸性溶液中的抗酸蚀能力,促进脱矿牙骨质的再矿化,且SDF添加GSH对金黄地鼠颊黏膜无明显刺激作用,有望成为抑制早期牙骨质龋发展的理想药物。图6幅;表14个;参160篇。
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