内生细菌定殖在植物内部,能有效防治植物病害。目前内生细菌还未在农业上广泛应用,原因之一就是内生细菌防治植物病害的机理不明确,防治效果无法控制。本实验室筛选到一株荧光假单胞菌R15对辣椒疫病的防治效果较高,接种实验证明其对辣椒疫病的防效随着其在辣椒根内的定殖数量增加而增加,定殖数量达到6.3×105cfu/g以上,防效达到100%,在接种后维持高防效的时间为14 d,随后定殖量逐渐下降,防治效果也降低。本实验为了探索荧光假单胞菌R15防治辣椒疫病的机制,利用cDNA-AFLP技术分析辣椒接种R15和清水处理的植株在挑战接种辣椒疫霉菌叶片的差异表达基因,明确R15菌株定殖高峰期针对辣椒疫霉菌侵染诱导的抗性基因。同时通过不同的处理方式的设计实验找到荧光假单胞菌R15在辣椒根内维持高定殖数量的方法,以保证防治效果的稳定。cDNA-AFLP技术分析R15诱导辣椒对辣椒疫霉菌抗性基因的实验:利用30对选择性扩增引物获得了 137条TDFs,测序成功的为29条,其中24个基因上调表达,5个基因下调表达。在NCBI中经Blastx比对和功能分类分析发现内生细菌诱导的基因包括:功能未知基因以及未找到同源序列基因共11个,占37.9%;基础代谢、能量、蛋白运输和储存类基因各3个,分别占10.3%;信号转导、转录和抗病防御蛋白基因各2个,分别占6.9%;参与细胞结构、定位和蛋白质合成的基因各1个,分别占3.5%。其中有5个蛋白基因已为报道参与植物抗病性过程,分别为乙烯反应元件结合蛋白基因、热休克蛋白70基因、细胞色素P450蛋白基因、胺氧化酶基因和钙依赖的蛋白激酶基因。对获得的其中4个TDFs利用qRT-PCR技术分析差异基因表达模式,验证cDNA-AFLP表达谱,结果显示其表达模式符合cDNA-AFLP表达谱。R15稳定定殖的处理实验:采用接种后重复伤根法、重复伤根接种法、接种后重复浇灌尿素溶液法和接种后重复灌菌液法4组实验。结果表明重复伤根和重复浇灌尿素溶液处理不能维持R15菌株的定殖量,防治辣椒疫病的效果不理想;重复伤根接种能使R15的定殖量明显增加,但是多次伤根,对植物体造成伤害,防治辣椒疫病的能力下降;重复灌菌液接种能使R15在辣椒体内的定殖数量稳定保持在4.1×105 cfu/g以上,并且防治效果也维持在90%～100%。因此,生防菌荧光假单胞菌R15的使用方法是在第一次接种后,每隔15～20 d在辣椒根部进行菌液灌根接种,可以高效防治辣椒疫病的发生。