【摘 要】
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micro RNA(miRNA)是一类长度为21-24 nt单链非编码小RNA,广泛参与了植物的生长发育,激素信号传导,形态建成,生物和非生物逆境胁迫的响应。目前,在拟南芥等植物中已有很多关于
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micro RNA(miRNA)是一类长度为21-24 nt单链非编码小RNA,广泛参与了植物的生长发育,激素信号传导,形态建成,生物和非生物逆境胁迫的响应。目前,在拟南芥等植物中已有很多关于miRNA的研究报道,然而关于其在棉花中的功能相关的研究很少。本实验主要目的是探究miR160在棉花胚珠发育中的功能,以下为本研究的主要结果:利用生物信息学手段在陆地棉TM-1基因组中预测到10个miR160前体成员,它们编码的成熟miRNA序列完全相同。进一步预测到16个可能的miR160靶标基因,这些基因与拟南芥中的生长素响应因子ARF10、ARF16、ARF17同源。在陆地棉YZ1中检测了miR160及其靶标的表达模式,结果显示miR160在开花前3天(-3 DPA)到开花当天胚珠(0 DPA)中优势表达,且随着胚珠发育其表达模式与靶标ARF呈负相关,由此推测,miR160可能与棉花胚珠的发育存在密切关系。为了探索miR160在胚珠发育中的功能,构建了种皮特异启动子FBP7驱动的miR160的模拟靶标的表达载体,在陆地棉YZ1中进行遗传转化,从中选取具有稳定遗传的阳性株系考察其表型,发现FBP7::Mimicry160转基因系的棉铃和种子变小。考种结果显示,FBP7::Mimicry160转基因系的籽指,衣指明显变小;上半部纤维长度显著变短。胚珠石蜡切片结果显示转基因株系胚珠内表皮薄壁细胞显著变小,胚珠表皮厚度变薄。进一步分析发现,在FBP7::Mimicry160转基因系中靶标ARF基因表达量上调,表明miR160可能通过负调控其靶标ARF参与棉花胚珠的发育过程。同时我们还构建了FBP7启动子驱动拟南芥miR160基因在棉花中超表达的转基因棉花,然而,在FBP7::AtmiR160转基因系中miR160表达量没有上调,表型也没有显著差异。
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