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目的:本实验通过高脂饮食复制大鼠胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)模型,观察抵当汤对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖周期中G0/G1期、S期、G2/M期各期的细胞数量、增殖指数(PI)及细胞促凋亡基因Fas、抗凋亡基因Bcl-2的影响,旨在从分子、细胞及基因水平来探讨抵当汤防治以IR为病理基础的心脑血管疾病的作用机制,为临床应用提供理论研究依据。抵当汤出自于医圣张仲景之手,由大黄、虻虫、桃仁、水蛭四味药物构成。此方为主要治疗太阳及阳明蓄血重证的经典方剂,有活血通络、逐瘀攻下的作用。我们采用抵当汤预防性干预IR大鼠模型,探讨血管平滑肌细胞增殖和凋亡的机制及调控的方法,为临床用药提供科学依据。方法:1选用体重为180g-220g健康清洁级雄性Wistar大鼠,共35只,适应性喂养1w后,随机分为5组:空白对照组(Ⅰ组)、模型组(Ⅱ组)、抵当汤低剂量组(Ⅲ组)、抵当汤高剂量组(Ⅳ组)、血脂康组(Ⅴ组)。每组各7只。2实验给药:空白组喂普通饲料,其余各组喂高脂饲料。空白组与模型组每日均灌胃蒸馏水(10ml/Kg);抵当汤低剂量组每日灌胃抵当汤药液1g生药/Kg(此用药量相当于成人每日每公斤体重的10倍);抵当汤高剂量组每日灌胃抵当汤药液2g生药/Kg(此用药量相当于成人每日每公斤体重的20倍);血脂康组每日灌胃血脂康0.2g/Kg(此用药量相当于成人每日每公斤体重的10倍)。3指标检测:喂养8w后,断头取血,测定血脂,空腹血糖、胰岛素,进而计算胰岛素敏感指数、胰岛素抵抗指数;留取胸主动脉,剪去外膜附着组织,一部分置于10%福尔马林中固定,待观察病理形态;一部分置于10%的乙醇中,应用流式细胞仪检测平滑肌细胞增殖周期中各期的细胞数量及增殖指数;一部分置于4%的多聚甲醛中,待免疫组化SP法检测凋亡基因Fas和Bcl-2的表达水平。结果:1抵当汤对IR大鼠ISI、HOMA-IR的影响与空白组相比,模型组ISI降低(P<0.05),HOMA-IR明显升高(P<0.01);抵当汤低剂量组、高剂量组与模型组比较,ISI明显升高(P<0.01),HOMA-IR明显降低(P<0.01);抵当汤低剂量组与高剂量组相比,低剂量组有优于高剂量组的趋势,但无统计学意义;而抵当汤低剂量组、高剂量组与血脂康组相比,无统计学意义。表明抵当汤可以提高胰岛素敏感性,改善胰岛素抵抗状态。2抵当汤对IR大鼠血脂的影响与空白组相比,模型组大鼠TC、TG、LDL-C均升高(P<0.01),而HDL-C明显降低(P<0.01);抵当汤低剂量组与模型组相比,大鼠TC、TG、降低(P<0.01),LDL-C降低(P<0.05),而HDL-C明显升高(P<0.01);抵当汤高剂量组与模型组比较,大鼠TC、TG、LDL-C均明显降低(P<0.01);而HDL-C明显升高(P<0.01);抵当汤高剂量组与抵当汤低剂量组相比,高剂量组有优于低剂量组的趋势,但无统计学意义;抵当汤低剂量组与血脂康组相比,无统计学意义;抵当汤高剂量组与血脂康组相比,TC降低(P<0.05),TG、LDL-C有降低趋势,但无统计学意义,HDL-C升高(P<0.05)。3抵当汤对IR大鼠血管平滑肌细胞增殖周期的影响与空白组相比,模型组G0/G1期比率明显降低(P<0.01),而S期和G2/M期比率明显升高(P<0.01),PI明显升高(P<0.01);抵当汤低剂量组与模型组比较,G0/G1期比率升高(P<0.05),S期比率明显降低(P<0.01),G2/M期比率有下降趋势,但无统计学意义,PI降低(P<0.05);抵当汤高剂量组与模型组比较,G0/G1期比率明显升高(P<0.01),而S期和G2/M期比率明显降低(P<0.01),PI明显降低(P<0.01);抵当汤低剂量组与高剂量组相比,高剂量组有优于低剂量组的趋势,但无统计学意义;抵当汤低剂量组、高剂量组与血脂康组相比,无统计学意义。表明抵当汤可以降低PI,从而抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖。4抵当汤对IR大鼠Fas、Bcl-2表达水平的影响与空白组相比,模型组Fas表达明显降低(P<0.01),Bcl-2表达升高(P<0.05);抵当汤低剂量组、高剂量组与模型组比较,Fas表达明显升高(P<0.01),Bcl-2表达明显降低(P<0.01);抵当汤低剂量组与高剂量组相比,高剂量组有优于低剂量组的趋势,但无统计学意义;抵当汤低剂量组、高剂量组与血脂康组相比,无统计学差异。表明抵当汤可以升高Fas表达水平,降低Bcl-2表达水平,从而促进大鼠血管平滑肌细胞的凋亡。5主动脉病理检查空白对照组:主动脉内膜有单层完整的内皮,内皮下层有少量疏松结缔组织。中膜平滑肌走行清晰,无增生;弹力纤维未见异常。模型组:内膜明显增厚,内膜层可见内皮有炎性细胞堆积,内皮不完整,高低不平,内皮下层明显增厚,有大量排列紊乱的平滑肌纤维,中膜弹力纤维断裂或紊乱,平滑肌增生明显。抵当汤低剂量组:内膜内皮完整,未见炎性细胞但表面稍显起伏不平整,内皮下层略厚,可见少量平滑肌,弹力纤维排列未见明显异常,中膜平滑肌略厚,部分弹力纤维波纹断裂。抵当汤高剂量组:内膜内皮完整连续,内皮表面未见炎性细胞,内皮下层很薄,未见明显增生的弹力纤维和平滑肌;中膜平滑肌厚度均匀,增生不明显。血脂康组:内皮完整,内皮下层很薄,未见明显增生的弹力纤维和平滑肌;中膜平滑肌走行清晰,厚度均匀,增生不明显。结论:1饲喂高脂饲料成功复制IR大鼠模型,证明高脂饮食可以引起IR。2抵当汤使IR大鼠ISI升高,HOMA-IR降低,表明抵当汤可以提高胰岛素敏感性,改善胰岛素抵抗状态。3抵当汤可以降低TC、TG、LDL,升高HDL,具有调节血脂的作用,进而改善胰岛素抵抗状态。4抵当汤使IR大鼠血管平滑肌细胞PI降低,表明抵当汤可以抑制血管平滑肌细胞的增殖。5抵当汤使IR大鼠血管平滑肌细胞Fas表达水平增加,Bcl-2表达水平降低,表明抵当汤可以促进血管平滑肌细胞的凋亡。