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丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge)的干燥根及根茎。具有祛瘀止痛,活血通经,清心除烦之功效。用于月经不调,胸腹刺痛,心烦不眠,肝脾肿大,心绞痛等病症。从丹参水溶性部分分离得到有效成分丹参素,是丹参水溶性提取物的主要有效成分。药理实验研究证明,丹参素能扩张心脑血管,抵抗血小板粘附聚集,清除氧自由基等作用,但丹参素水溶性好,脂溶性差,属于生物药剂学系统中的Ⅲ类,口服生物利用度低。磷脂复合物是近年来一项可以改善药物生物利用度的制剂技术,故本研究拟以丹参素为模型药物,以丹参素与磷脂的结合率为评价指标,采用溶剂法将丹参素和磷脂制备为磷脂复合物,增强丹参素对细胞膜的亲和性,以达到提高其生物利用度的目的。在丹参素磷脂复合物的基础上,制备其大豆油/橄榄油/椰子油溶液,进一步增强丹参素的脂溶性,改善体内吸收,提高生物利用度。本文首先对丹参素和磷脂复合物及油溶液进行了较为系统的研究,在此基础上对丹参素磷脂复合物的制备工艺进行考察和优化,并对制备所得复合物进行表征和理化性质考察,最后对丹参素原料药、丹参素磷脂混合物、丹参素磷脂复合物及其油溶液在大鼠体内药动学特征进行研究,为丹参素制剂的研究和开发提供参考。本课题具体内容包括以下几个部分:一、丹参素磷脂复合物的制备、表征及理化性质研究(1)磷脂复合物制备工艺的优化以药物(丹参素)与磷脂的结合率为考察指标,研究反应溶剂、反应物浓度、磷脂与丹参素的投料比(w/w)、反应时间及反应温度等因素对结合率的影响。在单因素考察的基础上,选择对磷脂复合物结合率影响显著的三个因素,即反应物浓度、磷脂与丹参素的投料比、反应温度,采用星点设计法优化复合物的制备工艺,并对实验结果进行拟合分析,得最佳工艺为:反应溶剂为无水乙醇;反应物浓度为45 mg/100mL;磷脂-药物投料比(w/w)为2:1,反应时间为2 h,反应温度为57℃。对最佳工艺进行验证,结果表明重复性好。(2)磷脂复合物的表征及理化性质研究由示差扫描量热分析(DSC)、X-射线衍射分析(XRD)图谱可以看出,在磷脂复合物中丹参素的吸热峰、晶体特征消失,表明磷脂复合物中丹参素以无定型的形式存在;红外(IR)分析显示,与丹参素原料药相比,丹参素磷脂复合物并没有新的化学键形成,推测复合物中丹参素与磷脂以氢键或范德华力等形式结合;油水分配系数(P)研究表明,与丹参素原料药相比,复合物中丹参素在不同pH的PBS溶液中的油水分配系数都有所增加,表明其脂溶性有所增强。二、丹参素磷脂复合物在大鼠体内药动学的研究(1)建立准确、可靠、简便的大鼠血浆中丹参素含量的测定方法色谱条件:Waters ACQUITY UPLC BCH C18柱(1.7μm,2.1×100 mm);保护柱:BCHC18柱(1.7μm,2.1×5 mm);流动相为(A)0.1%甲酸水-(B)乙腈,梯度洗脱,0-0.5 min, 90% A,10% B,0.5-1.5 min,10% A,90% B,1.5-2.5 min,10% A,90% B,2.5-3.0 min, 90% A,10% B,流速为0.30 mL/min;柱温35℃,进样量:5 μL。质谱条件:采用ESI离子源,负离子检测,丹参素m/z:196.904/134.898,内标对羟基苯甲酸m/z:136.777/64.941。(2)大鼠灌胃给予丹参素、丹参素-磷脂混合物、丹参素磷脂复合物的体内药动学研究健康雄性SD大鼠15只,随机分为三组,分别灌胃给予丹参素原料药、丹参素磷脂混合物和丹参素磷脂复合物的生理盐水溶液,LC-MS/MS测定不同时间间隔的血药浓度,运用DAS软件计算药动学参数。结果显示,与丹参素原料药相比,大鼠灌胃丹参素磷脂复合物后,丹参素在大鼠体内的生物利用度提高了0.49倍,达峰时间延长,说明丹参素亲脂性提高,能够增加其的吸收。三、丹参素磷脂复合物油溶液在大鼠体内药动学的研究取健康雄性SD大鼠24只,随机分为四组,分别灌胃给予丹参素磷脂复合物的生理盐水/大豆油/橄榄油/椰子油溶液,LC-MS/MS测定不同时间间隔的血药浓度,运用DAS软件计算药动学参数。结果表明,与丹参素磷脂复合物生理盐水溶液相比,大鼠灌胃丹参素磷脂复合物的大豆油/椰子油溶液后,丹参素生物利用度显著得到提高,AUC分别增加为复合物的1.44倍和1.91倍;但丹参素磷脂复合物的橄榄油溶液的生物利用度小于丹参素磷脂复合物生理盐水溶液,其原因有待进一步研究。