盐生杜氏藻具有独特双结构域3-磷酸甘油脱氢酶的功能鉴定

来源 :四川大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:q396782458
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
盐生杜氏藻Dunaliellesalina(简称盐藻)是迄今为止世界上发现的最耐盐的真核光合生物,而甘油是盐藻用于调节细胞内外渗透压变化的关键调渗物质。依赖NAD+辅酶的3-磷酸甘油脱氢酶(GPD,ECl.1.1.8)是盐藻甘油代谢途径中的关键酶。因此,对该基因的功能研究在植物抗逆性和甘油工程菌的构建方面都将发挥极其重要的作用。本文预测,盐藻Osm-GPD可能同时具有3-磷酸甘油脱氢酶(GPD)与3-磷酸甘油磷酸化酶(GPD)双活性,且这一特点与盐藻极其耐盐的特性相关。为证实提出的预测,本文从基因和蛋白水平上分别对盐藻Osm-GPD特殊基因结构进行功能研究。   第一,成功建立盐藻GPD和GPP的活性测定方法,比较不同盐浓度下两者活性变化的差异。   第二,在mRNA水平上研究Osm-GPD基因在盐藻中的表达的情况。   第三,盐藻Osm-GPD基因不同结构域基因片段的克隆。   第四,gpd1.1和gpd1.9基因片段的原核表达及纯化。构建大肠杆菌表达载体pET-GPD1.1和pET-GPD1.9,转入大肠杆菌BL21中表达,通过Ni亲和层析进行一步纯化。   第五,盐藻Osm-GPD天然蛋白的westernbloting分析。利用GPD1.1和GPD1.9重组蛋白分别制备两者的多克隆抗体,再对盐藻天然蛋白进行蛋白质印迹分析。   第六,通过功能互补实验,体内验证GPD1.1和GPD1.9的功能。构建酿酒酵母表达载体pRS-GPD1.1和pRS-GPD1.9,通过电转化分别转入缺陷GPD1的酿酒酵母W303-1A缺陷株中,分别检测两种重组菌对缺陷型细胞耐盐、耐渗生长的互补效果。
其他文献
1998年一种内皮细胞抑制因子从经EB病毒转化的B细胞系培养液上清中提纯出来,经鉴定证实为Calreticulin [Calreticulin主要作为ER(内质网)中Ca2+的贮存器参与Ca2+的信号转导]N-
随着网络信息数据爆发式增长,云存储在云计算的基础上飞速发展,目的是为了可以将企业和个人从繁重而复杂的数据存储中解脱出来。由于网络数据复杂,企业数据存储庞大,要求云存
  本文采用RACE方法克隆了HWTX-Ⅴ的cDNA,并将其归类于超家族中。根据毒素的氨基酸序列设计RACE引物,通过叠合3’RACE和5’RACE扩增的序列就得到了毒素蛋白的cDNA全序列。HWT
  在很大程度上,细胞分化是由转录因子调节的。人们已经鉴定了几个大的转录因子家族。在哺乳动物中,锌指蛋白可能是最庞大的家族。锌指蛋白结构域主要由组氨酸和半胱氨酸组成
地球表层的大地电导率及其分布对于国家资源探测、无线电波环境和信息科学都非常重要,大地电导率数据是地波传播预测、电力传输电磁预测、雷电电磁场的计算、强磁暴地球感应电
2014年,中国移动在全国建设了70万个TD-LTE基站,根据中国移动的规划,2015年年底,基站总数超过100万个,随着4G移动通信网络覆盖范围的扩大,现代无线通信技术得到快速发展。新建成的
数据处理在现代天文学研究中有着重要的地位。天文研究中的数据处理涵盖了天文观测现场的数据存储与处理、观测数据后处理、天文数值模拟等多个应用场景。其中,天文数值模拟
β-内酰胺类抗生素及其衍生物的工业化生产正在发生重大变革,传统化学转化法正在逐步被酶催化法所取代。青霉素G酰化酶(penicillin G acylase or penicillin G amidase,E.C.3.5.1.11,简称PGA或PAC)是半合成β-内酰胺类抗生素工业的重要用酶,主要用于水斛青霉素或头孢菌素分别生成母核6-APA(6-氨基青霉烷酸)或7-ADCA(7-氨基头孢烷酸)。P
目的 探究人文关怀理念于鼻咽癌放疗护理应用中对治疗依从性的影响分析.方法 本课题随机选取2016年3月到2019年3月我院耳鼻喉科室收治的鼻咽癌患者70例作为观察对象,根据住院
THz波是指频率从0.1THz~10THz范围内的电磁辐射,由于其优越的特性和重要的学术价值近十多年来越来越多地受到人们的关注。在THz的研究领域中,研制高功率的辐射源是开展其他应用