海马脑片CA1区α7尼古丁受体功能特点研究

来源 :汕头大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sylviawan
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背景和目的:α7尼古丁受体(α7-nAChRs)参与众多重要生理过程,包括调节神经递质的释放、介导突触后兴奋反应、长时程增强以及认知功能等。研究表明脑内海马区有大量α7-nAChRs表达,且接受胆碱能纤维支配。但关于α7-nAChRs受体本身的功能特点的研究仍很不充分,值得进一步深入和拓展,特别是其他神经递质(如谷氨酸等)对α7-nAChRs受体功能的影响仍有待进一步研究。  考虑到课题组后续可能开展的相关转基因动物研究,本工作主要在昆明小鼠(Kunming Mice,KM)海马脑片CA1区中间神经元上对α7-nAChRs功能进行研究,并与常用的Sprague-Dawley(SD)大鼠的一些相关研究进行比较。本研究首先成功建立红外可视脑片膜片钳全细胞记录方法,之后较系统地观察了小鼠海马脑片CA1区中间神经元α7-nAChRs的电生理特性和药理学特性,并同大鼠的一些相关结果作比较分析;以此为基础,结合形态学特点对小鼠海马CA1区的α7-nAChRs进行初步分类,并尝试探讨了谷氨酸(glutamic acid,Glu)对反复暴露于配体刺激的海马脑片CA1区α7-nAChRs功能的影响。  方法:应用红外微分干涉相差显微镜联合脑片膜片钳记录技术,结合药理学手段,在急性制备的健康昆明小鼠和SD大鼠海马脑片CA1神经元上,以氯化胆碱为激动剂,记录氯化胆碱诱发的全细胞电流反应,以此来反映α7-nAChRs的功能特点。高浓度的氯化胆碱(10mM)可由pico-spritzer III控制,通过特制玻璃微电极尖端瞬间喷射到神经元细胞膜而又不影响全细胞电流记录的高阻封接状态。特殊药物如PNU-120596(一种α7-nAChRs变构调节剂)、Glu等对α7-nAChRs功能的影响则可通过由pico-spritzer III控制的theta(θ)微玻管尖端施加到细胞上:θ管的一侧充满氯化胆碱(10mM),另一侧则同时充满氯化胆碱(10mM)+影响药物。其他药物如TTX(河豚毒素,钠通道阻断剂)则通过持续灌流的胞外液体作用到细胞上。数据处理采用Clampfit10.4+Excel VBA自编程辅助的方法,实现对全细胞记录结果的半自动规范化处理,并以此为基础,建立开放式可扩展数据库,为后续相关研究打下良好基础。  结果:  1)适合实验的海马CA1区神经元在红外微分干涉相差显微镜下结构清晰,外观光泽度好、立体感强且具有明显突起。  2)喷射氯化胆碱(10mM,100ms)可诱发出一快速激活和迅速失敏的内向全细胞电流,且该反应能被10nM的MLA(α7-nAChRs的特异性阻断剂)完全阻断,2μM的PNU-120596共同作用可增加该电流的幅度并延长反应时间(灌流作用)。  3)固定氯化胆碱的作用时间(100ms),改变前后两喷药时间间隔,发现随着间隔时间的延长,第2次刺激的反应逐渐恢复;当间隔约80s时,第一次刺激对第2次刺激的反应基本无影响。  4)固定氯化胆碱的喷药间隔为80s,改变喷药时长,发现喷药时长在50-150ms的范围内反应的波形接近,幅度大且差别不大。  5)统计发现,小鼠和SD大鼠海马CA1神经元在静息膜电位、放电频率(刺激电流60
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