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禽流感是禽流行性感冒(Avian Influenza，AI)的简称，这是由A型流感病毒引起的禽类的一种重要传染病。有重要的公共卫生意义，本试验研制针对禽流感病毒H5亚型和H9亚型血凝素蛋白的单克隆抗体就是要为快速诊断禽流感奠定基础。 单克隆抗体是20世纪70年代诞生的一项生物高新技术，应用免疫学的抗体产生机理和细胞瘤杂交技术，获得单一抗原决定簇的高度均一相应抗体，该种抗体特异性好、敏感性高，与多克隆血清相比，具有绝对明显的优势。近年来禽流感已逐步成为养禽业危害最大的疫病之一，因此对禽流感进行快速、准确的诊断，已经成为做好该疫病防制的关键步骤之一。 本实验将灭活后的H5亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒与等体积的弗氏完全佐剂充分混匀后腹部皮下多点注射6周龄雌性Balb／c小鼠，H5亚型禽流感病毒200μg／只，H9亚型禽流感病毒180μg／只。然后每隔14天后再用弗氏不完全佐剂与之混合，共免疫2次，末次加强免疫以100μg／只尾静脉注射，3d后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2／0-Ag-14进行融合。饲养细胞在融合前一天制备。 当融合细胞长满细胞培养板时，取上清液。以间接ELISA和HI试验反复筛选阳性克隆，并经有限稀释法3次克隆，获得1株抗AIV H5亚型禽流感病毒的单克隆抗体，命名为A4G12，其细胞培养上清和腹水ELISA效价为1：32，1：6400，单抗亚类为IgGl；和1株针对H9亚型血凝素(HA)特异性的单克隆抗体，命名为B7D10，其细胞培养上清和腹水ELISA效价为1：64，1：12800。单抗亚类为IgGl，B7D10单克隆抗体具有HI活性。 本实验获得了1株针对H5亚型禽流感病毒的单克隆抗体A4G12，单抗A4G12没有血凝抑制活性，但其不与其它相关毒株发生交叉反应，故具有广谱性，可做临床检测用。本实验所获得的另外一株针对H9亚型禽流感病毒血凝素蛋白的单克隆抗体B7D10有血凝抑制活性，单抗特异性试验证明单抗B7D10与其它相关毒株均不具有交叉反应，具有良好的亚型特异性，可为进一步建立基于该单抗的快速鉴别诊断方法，如利用单抗建立ELISA检测禽流感H9亚型病毒和抗体免疫胶体金标记快速检测禽流感H9亚型病毒试纸条等检测手段奠定基础。