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背景非特异性、广泛的异常免’疫激活是人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,简称HIV)感染进展为获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的一个重要标志,HIV-1感染过程中持续的抗原刺激和异常免疫活化可以导致免疫耗竭,同时导致效应细胞功能失调及丧失增殖能力。免疫活化水平及免疫衰竭水平是艾滋病疾病进展的重要标志。长期有效HAART能够抑制HIV复制及异常免疫激活,逐步实现免疫重建,降低发病率和死亡率,但感染者体内仍有病毒持续存在,原因在于HIV在感染早期就建立一个潜伏库,该潜伏库主要由静息记忆型CD4+T细胞组成,这些细胞的基因组中整合有HIV反转录生成的原病毒DNA,转录受到抑制或转录水平极低,宿主免疫系统无法识别和清除该潜伏库病毒。但是HIV感染者一旦停止HAART该潜伏库病毒又会继续活化转录复制,即出现体内病毒反弹,病毒的大量复制又进一步导致异常免疫活化。HIV异常免疫活化和病毒潜伏库的存在是IHIV病毒持续感染的重要因素。MiR-155是调节免疫反应的重要microRNA,在调控免疫反应和淋巴细胞分化等方面具有重要作用。在各种活化的免疫细胞,特别是在效应/效应记忆CD8+T细胞中表达显著上调,而中央记忆性CD8+T细胞呈低水平表达。Seddiki等人已研究证实,在HIV-1感染中,miR-155通过调控初始型调节性T细胞和CD4+T细胞向活化的细胞子集转换,进而影响HIV-1的病理进展。MiR-155异常表达也参与HIV潜伏库细胞的形成。有研究显示miR-155可以靶向作用于TRIM32,使短暂激活的潜伏库细胞回到潜伏状态。此外,miR-155通过作用于HIV-1复制依赖的宿主因子(这些宿主因子参与整合前复合体的核转运过程)使HIV病毒复制中断,使用miR-155处理宿主巨噬细胞显示整合前复合物(晚期逆转录产物)增多。目前对在HIV-1感染者外周血中的表达特征及其在HIV病理机制中的作用不甚清楚。明确miR-155异常表达及其与HIV/AIDS患者的免疫活化及HIV-1 DNA相关性,对HIV/AIDS的临床诊治具有重要意义。目的明确miR-15 5在HIV-1感染者外周血中的表达特征及其与HIV/AID S患者机体免疫活化及HIV-1 DNA相关性,通过细胞模型验证miR-155表达调控对潜伏细胞激活及HIV病毒复制的影响。方法1.研究对象:收集HIV感染者(分为HARRT治疗成功者64例、失败者57例,未治疗者40例)、正常对照者35例临床资料,同时收集分离以上研究组和对照组血浆和PBMC、CD4+T、CD8+T细胞。2.miR-155检测:采用荧光定量PCR检测在HIV感染者各组和正常对照者血浆和细胞(PBMC、CD4+T、CD8+T)中表达变化,同时流式检测CD4+T、CD8+T细胞数,免疫细胞活化(CD4/CD8 CD38)及免疫衰竭(PD1)相关指标;进一步分析HIV感染者miR-155的表达水平与CD4+、CD8+T细胞免疫活化和免疫耗竭水平相关性。3.HIV-1DNA检测:采用HIV-1DNA检测试剂盒检测HIV感染者(HARRT治疗成功者,失败者,未治疗者)全血HIV DNA含量;进一步分析:miR-155表达水平与HIV-1 DNA相关性;4.在潜伏细胞(J-Lat)及HIV感染细胞(H9/HIV ⅢB)上过表达或抑制miR-155,验证miR-155表达调控对潜伏细胞激活及HIV感染细胞HIV病毒复制的影响。(核心抗原P24的水平通常被认为是病毒复制的间接标志,我们通过检测P24来评价miR-155表达调控对潜伏细胞激活及HIV病毒复制的影响)5.统计方法:所有数据用SPSS 17.0统计软件分析。检测结果均采用均数±标准差(x±s)表示。两组间比较采用独立样本t检验,多组样本均数比较采用One-way ANOVA,相关分析采用Spearman相关分析方法。P<0.05为差异有统计学意义。结果1.HIV-1感染者外周血PBMC、CD4+T、CD8+T细胞miR-155表达显著高于正常对照(P<0.01);HAART治疗成功者较治疗失败者显著下降(P<0.05),且接近正常水平;血浆miR-155表达水平与细胞相反2.HIV病毒感染导致CD4+T、CD8+T细胞异常免疫活化(CD38)和免疫耗竭(PD1),有效HAART治疗能够改善CD4+T、CD8+T细胞免疫活化和免疫耗竭水平,进一步相关性分析发现,miR-155表达与HIV-1感染者T细胞免疫活化CD38、免疫耗竭PD-1正相关;3.HAART治疗成功组HIV-1DNA显著低于治疗失败和未治疗组(P<0.01),HIV-1DNA与CD4+T细胞miR-155表达水平正相关,与CD4+T免疫活化水平正相关;4.过表达miR-155可以减少潜伏细胞激活后P24抗原的表达,但是对HIV-1慢性感染细胞(H9/HIVIIIB)HIV-1P24抗原的表达没有影响。结论1.HIV-1感染者miR-155表达水平升高且与HIV-1感染者T细胞免疫活化CD38、免疫耗竭PD-1正相关,miR-155在HIV-1免疫活化免疫耗竭中起着重要的调控作用。2.miR-155与HIV-1DNA成正相关,体外研究证实过表达miR-155具有抑制潜伏细胞激活的作用