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目的:乳腺癌（human breast cancer）是在女性群体中发病率和致死率均居首位的恶性肿瘤，年发病人数将近140万。虽然以紫杉醇等为代表的化疗药物临床应用最为广泛，但由于毒性大，且易产生多药耐药，因此，寻找安全有效的抗乳腺癌药物先导化合物具有重要意义。Saxifragifolin D（SD）是从中草药点地梅（Androsace umbellata (Lour.) Merr.）中分离得到的三萜皂苷类化合物，对多种肿瘤细胞均具有显著的生长抑制作用。本论文目的在于研究SD对乳腺癌细胞的生长抑制作用及其作用机理，为将SD发展为抗乳腺癌药物先导化合物提供科学基础。方法：MTT法检测乳腺癌细胞存活率；透射电镜观察乳腺癌细胞超微结构变化，包括染色质断裂、凋亡小体、自噬体和内质网肿胀；PI染色试验检测细胞周期；Hochest33258染色试验及Alexa Fluor488Annexin V/PI双染试验检测细胞凋亡；采用荧光探针JC-1、Fluo-3-AM和CM-H2DCFDA分别检测线粒体膜电位、胞浆中钙离子浓度和ROS含量；采用荧光染料MDC和Cyto-IDTMAutophagy检测细胞自噬体；Western Blot检测凋亡、自噬、内质网应激等通路的相关蛋白表达水平；蛋白组学技术检测SD处理前后乳腺癌细胞总蛋白表达的变化。结果：SD可显著抑制人乳腺癌细胞MCF-7（雌激素受体阳性）和MDA-MB-231（雌激素受体阴性）细胞的生长，IC50值分别为9.30±1.26μM和4.46±1.21μM。雌激素受体拮抗剂ICI182.780预处理MCF-7细胞，不影响SD的细胞毒性，提示SD的抗乳腺癌作用与雌激素受体无关。作用机制研究表明SD能上调Bax表达、促进Cyto-C释放、激活caspase级联反应和PARP裂解，导致MDA-MB-231细胞凋亡，提示SD通过线粒体途径诱导凋亡。进一步发现SD处理后细胞出现双层膜包裹的和Cyto-IDTMAutophagy染色阳性的自噬体、MDC染色阳性的自噬溶酶体，同时观察到自噬标志蛋白LC-II、Beclin1、Atg5、Atg16L表达上调，提示SD诱导乳腺癌细胞出现自噬。而采用BafilomycinA1（BAF）和Beclin1siRNA预处理抑制自噬后，SD诱导的细胞凋亡率显著降低，提示自噬可能促进凋亡。我们还发现SD作用引起内质网肿胀，ROS大量释放，钙离子浓度升高，Bip、Calnexin和CHOP、IRE1α表达升高，XBP-1剪接活化，说明SD能诱导乳腺癌细胞产生内质网应激；采用tauroursodeoxycholic acid（TUDCA）和IRE1α siRNA预处理抑制内质网应激，发现SD诱导的细胞自噬率和凋亡率均显著降低；采用抗氧化剂N-acetyl-L-cysteine（NAC）预处理抑制ROS升高，发现细胞内质网应激标志蛋白IRE1α下降，自噬率和凋亡率也降低；以上结果说明SD诱导的细胞自噬和凋亡可能部分依赖于ROS介导的内质网应激。此外，蛋白组学的研究鉴定了氧化还原酶、细胞代谢相关蛋白、蛋白质合成相关蛋白、蛋白质降解相关蛋白和信号转导相关蛋白等共21个差异蛋白，经实验验证和生物信息学综合分析，提示SD对乳腺癌细胞的生长抑制作用可能与其调控细胞内的氧化还原酶功能相关。结论:三萜皂苷化合物SD通过ROS介导的内质网应激途径诱导乳腺癌细胞自噬和凋亡，最终抑制细胞增殖。