论文部分内容阅读
目的:
本研究采用慢性低氧动物模型,利用Morris水迷宫实验和8-臂迷宫实验来检测小鼠空间学习记忆和认知功能,并测定小鼠皮质、海马、纹状体内β-淀粉样蛋白(Aβ40)的表达,结合整体行为学和分子生物学指标来探讨慢性低氧与阿尔茨海默病的相关性。
方法:
(1)实验分组:①选用3月龄清洁级C57BL/6J雄性小鼠42只,随机分成3组:第1组常氧对照组(n=14);第2组为4周低氧组(n=14);第3组为8周低氧组(n=14);②选用12月龄清洁级C57BL/6J雄性小鼠42只,随机分成3组:第1组常氧对照组(n=14);第2组为4周低氧组(n=14);第3组为8周低氧组(n=14)。
(2)慢性低氧模型的制作:动物在低氧舱中觅食和饮水不受限制,按气体流动方向设置低氧舱进出气孔,由进气孔向密闭低氧舱内充人氮气和氧气,采用数字测氧仪检测低氧舱中氧浓度,调节气体流量和流速。慢性低氧组小鼠置于低氧箱中,O2浓度为8%-12%,CO2浓度低于1%,每天持续8 h(9:00~17:00),分别连续低氧4周和8周;常氧对照组置于相同氧舱中,氧舱中为氧浓度21%的空气,每天持续8 h(9:00~17:00),共4周。
(3)观察指标:①行为学检测方法:采用Morris水迷宫实验方法和8-臂迷宫实验方法分别检测小鼠空间参考记忆和空间工作记忆能力。②分子生物学指标:采用ELISA实验方法测定小鼠皮质、海马、纹状体内Aβ42的表达,用免疫组化方法测定小鼠脑组织BrdU标记的神经干细胞的表达。
结果:
(1)行为学检测结果:①3月龄8周低氧组与3月龄4周低氧组及对照组相比Morris水迷宫的定位航行实验的逃避潜伏期显著延长,3月龄4周低氧组与对照组相比无统计学差异;3月龄各组在空间搜索实验穿越原平台位置的次数无统计学差异;3月龄8周低氧组Morris水迷宫重复获取实验中工作记忆成绩显著差于对照组,而与3月龄4周低氧组相比无统计学差异,3月龄4周低氧组与对照组相比也无统计学差异。②12月龄8周低氧组与12月龄4周低氧组及对照组相比Morris水迷宫的定位航行实验的逃避潜伏期显著延长,12月龄4周低氧组与对照组相比逃避潜伏期也显著延长;12月龄8周低氧组在空间搜索实验穿越原平台位置的次数显著少于对照组,12月龄4周低氧组与对照组相比无统计学差异;12月龄各组在Morris水迷宫重复获取实验中工作记忆成绩无统计学差异。③在8-臂迷宫训练中,3月龄8周低氧组工作记忆及参考记忆错误次数显著多于对照组及3月龄4周低氧组,而3月龄4周低氧组与对照组相比无统计学差异;12月龄8周低氧组参考记忆错误次数明显多于对照组,而12月龄4周低氧组与对照组相比无统计学差异,12月龄各组工作记忆错误次数无统计学差异。
(2)分子生物学指标结果:①ELISA:12月龄8周低氧组海马内Aβ42表达显著高于12月龄4周低氧组和对照组,而12月龄4周低氧组和对照组相比无统计学差异,三组之间的皮质、纹状体内Aβ42表达无统计学差异。②免疫组化实验结果:3月龄8周低氧组脑组织内BrdU标记的阳性细胞数显著低于3月龄4周低氧组和对照组,3月龄4周低氧组和对照组相比无统计学差异。
结论:
(1)慢性低氧能够损害小鼠的空间学习记忆能力,低氧时间越久,这种损害程度越强;慢性低氧对成年小鼠长时记忆和短时记忆均有损害,但对老年小鼠以长时记忆损害为主。
(2)慢性低氧8周能使12月龄小鼠海马内Aβ42表达增加,提示慢性低氧能够促进小鼠脑组织老年斑的形成,并可能通过此过程进一步损害小鼠的认知功能。
(3)慢性低氧4周或8周均使小鼠侧脑室BrdU标记的阳性神经干细胞数显著减少,可能的机制为长期重度低氧导致在体神经干细胞死亡增加,提示不同程度的缺氧对小鼠脑组织神经干细胞的作用不同。