柑橘炭疽病的生物学特性及其拮抗酵母菌的研究

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本研究以温州蜜柑(C.unshiu Marcov.)和纽荷尔脐橙(C.sinensis L.cv.Newhall)为试材,分离获得19株柑橘炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)并对各菌株的致病力和T4柑橘炭疽病菌株的生物学特性及拮抗菌的筛选进行了研究,初步调查了柑橘炭疽病的发病规律,以便为柑橘炭疽病的快速鉴定及其病害的及早防治提供了有益的参考。主要研究结果如下:1.柑橘炭疽病的分离、鉴定及致病性分离到的19株柑橘炭疽病菌中,T4、T8对柑橘果实致病性最强,在条件适宜的情况下,5d后平均病斑直径大于15mm,发病率为100%;并应用rDNA-ITS分子标记分析和传统真菌形态学鉴定相结合的方法,鉴定T4菌株为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides Penz.)。2.T4菌株的生物学特性不同培养基对菌丝生长、菌丝干重及产孢量都有很大影响,其中C.gloeosporioides在CaA培养基中产孢量最大,可达4.81×107 Spores·mL-1,在桔汁培养基上菌丝生长最快。在察氏培养基上菌丝干重最大,培养6d的菌丝量达到1.14g;病原菌最适生长温度为25℃;最适产孢温度为30℃。光照条件对病菌的生长没有显著的影响,但光暗交替有利于产孢;pH对菌丝生长和产孢没有显著影响;炭疽病菌对多种单糖、双糖和多糖等碳源及有机氮、无机氮均可利用,其中蔗糖最优,其次为麦芽糖;最适氮源为蛋白胨和酵母浸膏,硫酸铵和氯化铵会抑制病原菌菌丝生长。C.gloeosporioides的分生孢子致死温度约为55℃处理10min。药敏性实验结果显示,在几种常用化学药剂中,以咪鲜胺和多菌灵的抑制效果最好,抑菌圈直径均达到28mm,抑菌率均为100%。3.炭疽病的发病规律在盛花期温州蜜柑和纽荷尔脐橙的雌蕊均未受到C.gleosporioides的侵染,其中花瓣带菌率最高,分别达到了42.5%、100%。在膨大期和成熟期果实的不同部位(除果肉外)都分离到了C.gleosporioides,不同部位受真菌潜伏侵染的程度不同,其分布呈一定的规律性,果蒂和脐部带菌率最高,其次为果柄部位,蒂部白皮层和脐部白皮层带菌率最低。4.接抗菌的筛选和拮抗效果通过离体初筛和复筛分别得到对炭疽病原菌有拮抗作用的酵母菌53株和12株。进一步通过果实接种,筛选出能有效抑制C.gleosporioides的酵母菌株WF-b-1和LF-8,当酵母浓度为1.0×108 CFU·mL-1时,果实发病率分别为40.60%和26.67%,与对照100%相比,分别降低了60.40%和73.33%。在一定浓度范围内,拮抗酵母菌株WF-b-1和LF-8的抑菌效果均与悬浮液的浓度成正相关;当酵母浓度降为1.0x107CFU·mL-1时,发病率分别增加到57.14%和53.33%。两株拮抗酵母菌的拮抗效果随温度变化的趋势不同;其中WF-b-1在15℃~25℃的培养温度下,发病率与温度成正相关;而LF-8在28℃的发病率低于其在25℃下的发病率。在15℃时培养6d,两株酵母菌的发病率分别从40.6%、48.2%降到8.3%、0。5.拮抗酵母菌的鉴定经形态和生理生化指标并结合rDNA-ITS分子标记分析和对WF-b-1和LF-8、A-7进行了鉴定。结果表明:WF-b-1为有孢圆酵母属(Torulaspora)的球有孢圆酵母(Torulaspora Pretoriensis)。LF-8、A-7属于有孢汉逊酵母属(Hanseniaspora)的葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)。
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