补骨脂查尔酮促进内皮祖细胞分化的药效学研究和机制探讨

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangbohan1991
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:  血管内皮是循环血液和组织间的一层天然屏障,在维持血管的形态和功能中起到重要的作用。但血管内皮在机体内外环境的刺激下容易发生功能紊乱,导致血管功能障碍,进而造成血管损伤。本研究以内皮祖细胞(EPCs)分化成内皮细胞(ECs)为基础,研究补骨脂查尔酮促进EPCs分化的作用,并进一步在动物体内对内皮祖细胞的增殖、动员和分化以及对损伤血管的修复能力进行验证;最后本课题对补骨脂查尔酮通过促红细胞生成素(EPO)及AMPK通路促进内皮祖细胞分化的机制进行探究,为临床治疗心血管疾病提供依据。  方法:  1.密度梯度离心法及差速贴壁法提取分离EPCs,镜下观察其形态,采用免疫细胞荧光技术对其进行鉴定;并用不同浓度补骨脂查尔酮刺激新分离的EPCs统计其细胞集落数和分化后EPCs和ECs的比例;  2.建立大鼠后肢缺血模型,并给予补骨脂查尔酮,随后检测其后肢血流量,并对缺血组织区域进行HE染色,统计毛细血管数量;采用免疫荧光染色对新生毛细血管进行鉴定,并统计毛细血管长度;同时检测其外周血中的EPO含量;  3.建立SHR颈总动脉损伤模型,给予补骨脂查尔酮后,取损伤颈总动脉进行HE染色,统计颈总动脉的内中膜面积比;  4.将EPO荧光素报告质粒转染入HEK293细胞,加入不同浓度的补骨脂查尔酮,检测其对EPO启动子的活性的影响;  5.补骨脂查尔酮分别刺激HUVECs及EPCs,随后检测各细胞中EPO的mRNA和蛋白含量。  结果:  1.内皮祖细胞分化7d后,细胞形态发生改变,由球形细胞变为梭型细胞;经免疫荧光鉴定,该细胞表面受体CD34及vWF呈阳性;中低浓度的补骨脂查尔酮,可显著促进EPCs及ECs的数量;  2.补骨脂查尔酮对大鼠后肢血流的恢复具有促进作用;并且显著增加了大鼠后肢骨骼肌上的毛细血管数量及长度,且新生血管呈现CD34及CD31双阳性;同时补骨脂查尔酮也可显著提高大鼠血液中EPO的含量;  3.补骨脂查尔酮可显著降低大鼠颈总动脉的内中膜面积比,促进大鼠颈动脉损伤的修复;  4.EPO荧光素报告基因结果得出低浓度的补骨脂查尔酮显著提高EPO启动子的活性,尤以0.2μM补骨脂查尔酮使得EPO启动子的活性达到峰值;  5.补骨脂查尔酮分别刺激HUVEC细胞及EPCs,结果表明其可显著增强细胞内EPO的mRNA的表达,且HUVEC细胞中EPO蛋白含量也明显增加。  结论:  本课题建立了体外提取分离和鉴定内皮祖细胞的方法,并探究补骨脂查尔酮对内皮祖细胞的作用。体外实验表明补骨脂查尔酮可促进内皮祖细胞的分化。动物实验结果显示,补骨脂查尔酮对大鼠内皮祖细胞的增殖及动员具有促进作用,并加速了大鼠后肢缺血的恢复以及缺血组织的血管再生,同时也可促进大鼠颈动脉损伤的修复。随后本课题组对其作用机制进行探究,结果表明补骨脂查尔酮通过AMPK通路和对EPO蛋白的调控,促进了内皮祖细胞的增殖和动员,并加速其对血管损伤组织的修复。说明补骨脂查尔酮可作为一个潜在的治疗心血管疾病的药物,为心血管疾病的治疗提供了新的方向。
其他文献
目的:研究冬凌草甲素抑制血管生成的活性,进而发挥抗肿瘤作用及其作用机制,为冬凌草甲素抗肿瘤作用的进一步开发提供依据。  方法:1.体外实验,通过培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC
目的:制备高乌头生物碱纳米结构脂质载体(AAS-NLC)经皮给药系统,通过纳米脂质载体化学促渗作用与微针物理促透作用相结合有效提高药物的经皮吸收效率,并利用NLC的缓释性能降低
对老鼠瓜种子中是否含有多种丰富的微量元素进行了测定,为维药老鼠瓜新用途的开发提供一定的信息和基础,用ICP-AES方法对Cu,Zn,Fe,Mn,Ca,K,Mg,Cr八种微量元素进行了含量测定,
清胃散为清胃泻火要方,《外科正宗》中记载由黄连、黄芩、生地、牡丹皮、升麻,生石膏6味药组成,临床上用于治疗胃部疾病,口腔性疾病和皮肤性疾病等。合剂具有疗效快、服用方便、
创意经济的发展决定了创意经济时代是一个多元化的时代,在这种多元化的背景之下,设计不再有统一的标准和固定的原则,本文试图通过对设计评价标准的分析为设计作品到底需要满
目的:观察黄芪生脉有效部位(HQSM)抗Beagle犬急性心肌缺血作用,并探讨其可能的作用机制。 方法:Beagle犬,随机分六组,分别为模型组、HQSM低、中、高剂量组、黄芪生脉饮组、合
目的:   1.对芒果叶(Mangiferaindica L.)及其混伪品扁桃叶(MangiferapersiciformisC.Y.WuetT.L.Ming)进行生药鉴别研究,为芒果叶药材提供生药鉴别依据;   2.对芒果叶进
目的:  参芪口服液具有益气滋阴,补血通阳复脉,镇惊养心安神的功效,是治疗心律失常的经验方剂。因其质量标准过于简单,为了保证参芪口服液的临床疗效和用药安全,对参芪口服液的质
目的:  探究传统中药黄芪的主要有效成份之一黄芪甲苷对高脂饮食诱导的肥胖小鼠有无减轻体重和降低血脂的作用并进行相关机制研究,为黄芪甲苷作为食物或者药物应用于治疗肥
藤黄生品有大毒,不能内服,内服必须要经过炮制,制藤黄毒性降低,开展中药藤黄炮制减毒机理的研究具有重要的意义。本研究从炮制前后多指标成分的变化和体内肠吸收差异的角度进行了