【摘 要】
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目的讨论癌基因溶酶体相关膜蛋白-2(LAMP2a)在肿瘤发生中的主要作用,在结直肠癌组织中表达及其临床病理意义。方法1、应用RT-PCR方法检测24例癌组织及癌旁正常组织中LAMP2a m
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目的讨论癌基因溶酶体相关膜蛋白-2(LAMP2a)在肿瘤发生中的主要作用,在结直肠癌组织中表达及其临床病理意义。方法1、应用RT-PCR方法检测24例癌组织及癌旁正常组织中LAMP2a mRNA的表达。2、采用蛋白印迹方法检测71例冰冻结直肠癌及癌旁正常组织中LAMP2a蛋白表达水平。3、为了避免细胞污染我们采用激光捕捉显微切割(LCM)鉴别结直肠腺癌病灶和正常腺上皮中LAMP2a mRNA的表达水平。4、构建组织芯片,利用免疫组化方法检测结直肠癌、癌旁正常组织和腺瘤中LAMP2a的表达,分析结直肠癌中LAMP2a的临床病理特征。5、结直肠癌中LAMP2 mRNA表达的生物信息学分析(Oncomine和TCGA数据库)。6、应用SPSS 17.0统计软件分析数据,数据用均值±标准差表示,组内差异采用独立样本T检验,Spearman等级分析用来分析结直肠癌组织不同病理特征与LAMP2a的关系,生存分析采用Kaplan-Meier法,Cox比例风险回归分析建立多因素生存分析数据的危险模型。结果1、结直肠癌组织中LAMP2a mRNA及蛋白的表达实时PCR结果显示结直肠癌组织中LAMP2a mRNA表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。利用激光捕捉显微切割技术(LCM)试剂盒检测LAMP2a mRNA表达情况,结果显示,LAMP2a mRNA在结直肠癌组织中低于正常组织。在结直肠癌组织中LAMP2a蛋白表达水平高于正常粘膜组织(P<0.05)。2、结直肠癌组织中LAMP2a蛋白表达与临床病理特征的关系。结直肠癌中LAMP2a表达高于癌旁正常粘膜(P<0.05),LAMP2a表达与肿瘤TNM分期和淋巴结转移呈负相关(P<0.05),但与淋巴管浸润、肝转移、浸润深度和分化程度无相关性(P<0.05)。生存分析结果显示LAMP2a阳性表达与患者生存率无统计学意义(P>0.05)。Cox比例风险模型表明,肿瘤浸润深度和远处转移是结直肠癌独立预后因素(P<0.05)。3、根据Skrzypczak2和TCGA的数据进行生物信息学分析,发现LAMP2m RNA在结肠组织中表达高于结肠腺瘤,在直肠中出现了同样的结果。TCGA数据还显示LAMP2 mRNA在结肠中表达高于直肠组织。MSI-和K-ras患者中LAMP2表达高于阳性患者。BRAF基因表达正常患者中LAMP2表达高于表达异常者。结论1、结直肠癌组织中LAMP2a m RNA表达水平低于癌旁正常组织,而蛋白表达高于癌旁正常组织。2、临床病理分析结果表明LAMP2a表达与结直肠癌TNM分期和淋巴结转移呈负相关。根据蛋白表达绘制出结直肠癌生存曲线,LAMP2a阳性表达与患者生存率无相关性。3、Cox比例风险模型表明,肿瘤浸润深度和远处转移是结直肠癌独立预后因素
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