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塞内卡谷病毒（Senecavirus A,SVA）可侵染不同日龄的猪,并导致新生仔猪死亡,对世界各国的养猪产业带来极大的威胁。因此开展SVA的生物学特性、遗传进化分析及免疫原性的研究对控制SVA的传播具有十分重要的意义。2018年3月,本研究从广东某规模化猪场采集6份疑似SVA引起水疱病发病猪的鼻吻、蹄冠部位的水疱皮和水疱液进行RT-PCR检测。结果显示,其中3份核酸电泳检测结果为SVA阳性。为了进一步分析SVA的生物学特性,本研究将3份阳性病料无菌处理后,分别用乳仓鼠肾细胞（Baby hamster syrian kidney,BHK-21）和猪肾细胞系（Porcine kidney-15 cells,PK-15）进行病毒分离。结果显示,接种病料的BHK-21细胞,盲传3代后可产生明显的致细胞病变效应（Cytopathic effect,CPE）,接种病料的PK-15细胞盲传3代后只产生轻微的CPE,细胞培养液SVA核酸检测均为阳性。表明,从病料中成功分离获得了3株SVA,将这3株分别命名为GD-SVA1-2018、GD-SVA2-2018、GD-SVA3-2018。为了观察SVA在BHK-21细胞的动态增殖规律,在光学显微镜下观察接种SVA的BHK-21细胞病变情况。结果显示,BHK-21细胞接种SVA后,4 h出现少量的病变、8 h出现部分病变、16 h出现完全病变、24 h病变细胞聚集并开始脱落。为了研究各SVA分离株在BHK-21上增殖滴度,本试验用TCID50测定方法分别测定GD-SVA1-2018、GD-SVA2-2018、GD-SVA3-2018的TCID50。结果显示,SVA各分离株在BHK-21上的病毒滴度分别为107.75TCID50/m L、108.25TCID50/m L、108.0TCID50/m L。SVA各分离株对氯仿敏感性的实验结果显示,氯仿处理后的SVA可引起BHK-21细胞产生CPE,符合SVA无囊膜的生物学特性。本研究通过RT-PCR扩增SVA全基因序列的5’端和3’端的基因片段,将鉴定成功的PCR产物克隆至p MD18-T载体,每个阳性重组质粒选取3个送往公司测序;通过重叠RT-PCR扩增SVA全基因序列的其余基因片段,将鉴定成功的PCR产物送往公司测序;用Seqman等软件对测序结果进行拼接,完成了GD-SVA1-2018、GD-SVA2-2018、GD-SVA3-2018全基因组测序。对3株分离株进行核苷酸序列相似性分析,结果显示,GD-SVA1-2018、GD-SVA2-2018、GD-SVA3-2018全基因组序列相似性高于99.5%,其中VP1基因相似性100%。接着针对SVA VP1基因,进一步分析本研究分离株与国内外SVA毒株的相似性及亲缘关系。相似性分析发现本研究分离株和近年来的广东SVA流行株相似性较高。遗传进化分析发现,本研究分离株和国内GD03/2017、GD01/2017毒株在同一分支上,这个分支的SVA毒株和美国USA/GBI26/2015亲缘关系较近。为了建立SVA动物感染模型,筛选5头SVA抗体阴性100日龄三元杂母猪,将母猪随机分为两组,其中感染组3头,对照组2头。通过滴鼻途径将3 m L(108.25TCID50/m L)的SVA BHK-21细胞培养物接种感染组母猪,同样的方式将3 m L DMEM接种对照组母猪。结果显示:接种SVA的部分母猪出现体温反应和水疱症状;接种SVA的母猪粪便中检测到SVA;接种SVA的母猪血液中均检测到含有SVA拷贝数。为了探索本研究分离株的免疫原性,首先用BHK-21细胞培养了滴度较高的SVA((108.25TCID50/m L),然后用β-丙内酯对其灭活。灭活完全的SVA病毒液与ISA 201佐剂1:1混合乳化制成SVA灭活疫苗,免疫60日龄母猪。本研究以3 m L/头的疫苗剂量接种母猪,3周后以同样方式进行二免,同时设立接种3 m L/头的PBS的母猪作为对照组。通过中和实验检测免疫后第7、14、21和28 d实验猪血清中SVA抗体效价。首免后第28天用3 m L(108.25TCID50/m L)的SVA对实验猪进行攻毒,观察并记录攻毒后实验猪的临床症状。中和试验结果显示,SVA灭活疫苗可刺激猪产生反应原性良好的抗体。攻毒结果显示,对照组的猪感染了SVA并出现了临床症状,接种SVA灭活疫苗的免疫组的猪正常。表明,本研究制备的SVA灭活疫苗具有优良的免疫原性,对免疫猪产生保护效果。综上所述,本研究成功分离到3株SVA,完成了3株SVA的全基因组测序;遗传进化分析表明,本研究SVA分离株为近年广东流行株,近年广东流行株均和美国USA/GBI26/2015亲源关系最近,为了解广东SVA的传播提供参考;成功建立SVA母猪感染模型,为研究SVA感染机制奠定基础;制备了具有良好免疫原性的SVA灭活疫苗,为我国防治SVA的传播提供参考。