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[研究背景]哮喘是由多种炎症细胞(嗜酸性粒细胞、肥大细胞和T淋巴细胞)参与、由IgE介导的慢性炎症性疾病,是一种由遗传因素和环境因素共同作用的多基因遗传病,主要表现为气道高反应性、气道阻塞、气道炎症和气道重构。临床以反复发作的咳嗽、喘鸣和呼吸困难为主要表现,可自愈或经药物缓解。近年来陆续报道哮喘发生与Th1、Th2细胞分化不平衡有关。STAT4(signaltransducer and activator of transcription 4)---T-bet(T-box expressed in T cells)途径与STAT6---GATA3途径分别被认为是Th1细胞与Th2细胞分化的两种主要途径。任何一条途径出现异常都会导致Th1/Th2细胞分化异常。已知Th2细胞的分化与哮喘发生密切相关,Th1方向分化减弱或者Th2方向分化增强都将导致免疫调节失常,引起哮喘。2005年,Park等在韩国人群中发现STAT4基因的单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP)与哮喘相关,并认为STAT4是特异性IgE产生的遗传学因素之一。T-bet是Th1分化的重要转录因子。Susetta等报道T-bet基因缺失的小鼠会发生哮喘。同时在2006年发现,T-bet基因多态位点与美国人群哮喘和气道高反应性相关。2005年在日本人群中也发现,T-bet基因多态位点与药物诱发的哮喘相关。IL-2位于4q27,包含4个外显子,2006年,Ulla Christensen等首次报道IL-2可作为哮喘的候选基因,并在丹麦人群中发现IL-2基因的两个多态位点与IgE介导过敏性疾病相关。上述遗传学研究提示STAT4、T-bet和IL-2基因在不同人群中与哮喘和气道高反应性有不同程度的相关性,但到目前为止,上述三个基因在中国汉族人群中与哮喘的相关性尚未见报道。[研究目的]利用病例—对照方法探讨STAT4、T-bet及IL-2基因的三个多态位点与中国汉族人群哮喘之间的相关性。这些多态位点分别是:STAT4基因启动子区域SNP位点—608 A＞G,T-bet基因—1993 T＞C,IL-2基因启动子区域—92T＞G。[研究方法]1.哮喘组与对照组样本收集:收集中国汉族哮喘患者及正常对照个体外周血样,提取基因组DNA。收集的哮喘患者均符合支气管哮喘的诊断标准;正常对照个体均无哮喘及其他过敏性疾病症状与病史,排除肝、肾疾病。2.基因分型,基因型及等位基因频率统计:用PCR-RFLP方法对STAT4基因—608 A＞G位点分型;用Tetra-primer ARMS-PCR方法对T-bet基因—1993T＞C位点和IL2基因—92 T＞G位点分型。根据琼脂糖凝胶电泳结果确定个体基因型,计算各位点在哮喘组及对照组中的基因型频率及等位基因频率。3.Hardy-Weinberg平衡吻合度检验:根据Hardy—Weinberg平衡定律计算各多态位点在哮喘组和对照组的预期基因型频率,采用卡方检验进行组间比较。4.基因型与等位基因分布差异检测:采用卡方检验比较各多态位点在哮喘组与对照组的基因型与等位基因频率差异,检验多态位点与哮喘的相关性。[结果]1.STAT4基因多态位点—608 A＞G,在哮喘组中,A/A、A/G、G/G基因型频率分别是0.536、0.377和0.086,在对照组中分别是0.515、0.399和0.086;等位基因A和G的频率在哮喘组分别是0.725和0.275,在对照组分别是0.715和0.285,经χ~2检验P=0.889。2.T-bet基因多态位点—1993 T＞C,哮喘组中,T/T、T/C、C/C基因型频率分别是0.630、0.315、0.055,在对照组中分别是0.632、0.324、0.044;等位基因T和C的频率在哮喘组分别是0.788、0.212,在对照组分别是0.794、0.206,经χ~2检验P=0.837。3.IL-2基因多态位点—92 T＞G,哮喘组中,T/T、T/G、G/G基因型频率分别是0.344、0.511、0.145,在对照组中分别为0.331、0.532、0.137;等位基因T、G的频率在哮喘组分别为0.599和0.401;在对照组分别为0.597和0.403,经χ~2检验P=0.894。[结论]STAT4基因多态位点—608 A＞G,T-bet基因多态位点-1993 T＞C以及IL-2基因多态位点—92 T＞G在中国汉族人群中与哮喘无显著相关,但不排除这三个基因内的其它多态位点与哮喘相关。