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本研究通过原核表达去信号肽的RH株弓形虫表面抗原SAG3蛋白，并制备SAG3的单克隆抗体，建立间接ELISA法和双抗夹心ELISA方法，并进行初步应用。SAG3去信号肽基因的克隆和原核表达提取RH株弓形虫的总RNA，反转录为cDNA为模板， PCR扩增SAG3基因。构建其原核表达载体pET-28a(+)-SAG3，并转化至E.coli BL21(DE3)中，IPTG诱导表达， SDS-PAGE检测蛋白表达情况，western blotting检测其反应性。结果显示，成功扩增了去信号肽的SAG3基因，测序结果与GenBank公布的弓形虫RH株SAG3基因序列同源性为100%。SDS-PAGE表明成功表达了去信号肽的SAG3蛋白，分子量大小为38Kda，western blotting结果显示重组蛋白能够被鼠抗弓形虫血清识别，具有很好的反应原性。刚地弓形虫RH株SAG3蛋白抗体检测的间接ELISA方法建立利用Ni-NTA亲和层析柱对SAG3蛋白进行纯化，并以纯化的SAG3蛋白作为抗原，建立弓形虫RH株蛋白抗体检测的ELISA方法。结果显示，经Ni-NTA亲和层析柱纯化后，SDS-PAGE分析在38kDa处有一条单一的目的蛋白带，成功纯化SAG3蛋白。建立的ELISA方法的最佳工作条件为：最佳封闭液是5%脱脂奶粉的PBST溶液，最佳检测条件是抗原包被浓度0.25μg/孔、被检血清稀释度1∶400、羊抗鼠二抗稀释倍数1:3000。建立的ELISA方法具有较高的敏感性，此方法与鼠抗C. andersoni阳性血清、鼠抗C. parvum阳性血清鼠、抗G. lamblia阳性血清、鼠抗E. tenella阳性血清和鼠抗Neosporacaninum阳性血清均无交叉反应，具有较强的特异性。用所建立的SAG3-ELISA方法检测了10份阳性血清，符合率100%。检测了24份普通级小鼠血清进行检测，阳性率为20.8%。弓形虫表面蛋白SAG3的单克隆抗体的制备及纯化以纯化的SAG3为免疫原，免疫小鼠，进行融合，制备抗SAG3的单克隆抗体。利用建立的SAG3-ELISA方法筛选出了2株能够稳定分泌抗体的细胞株1A1和3E5。腹水效价约为1:102400，单克隆抗体亚类鉴定1A1为IgG2a，3E5为IgM。Western blotting结果表明，1A1和3E5单克隆抗体均可识别重组SAG3蛋白。SDS-PAGE结果表明成功纯化了单抗腹水，能够清晰的观察到轻链和重链两条带。双抗夹心ELISA检测方法的建立以纯化的1A1单克隆抗体作为捕获抗体，以HRP标记的3E5单克隆抗体作为检测抗体，建立弓形虫的双抗夹心ELISA方法。所建立的夹心ELISA方法的最佳检测条件分别为：包被抗体1:100，HRP标记抗体1:400，被检血清最佳稀释度为1:10，最佳封闭剂为1%BSA。经验证此方法与犬新孢子虫阳性血清没有交叉反应，特异性较强。批内和批间重复试验表明建立的ELISA方法具有重复性。利用建立的ELISA方法对人工感染弓形虫的小鼠阳性血清（小鼠腹水经检测含有弓形虫虫体），和无弓形虫的SPF小鼠血清进行检测，结果符合率为100%。应用已建立的双抗夹心ELISA方法对85份弓形虫感染情况不明确的牛血清，63份鸡血清，58份犬血清和67份猪血清进行检测，发现阳性结果率分别为：7.06%，12.70%，10.34%和28.36%。本研究的检测方法要求的被检样品为血清，需要量少，易于采取，处理简单，特异性好，操作方便，利于推广，有一定的应用前景。