胰腺癌是目前预后最差的恶性肿瘤之一，近年来其发病率不断上升，而胰腺癌早期症状不典型，且缺少简单有效的检查手段，特别是缺乏特异性肿瘤标记物，因而早期诊断十分困难，临床确诊者大多为晚期，手术切除率为10％-20％，五年生存率仅为1％-5％。 胰腺癌95％以上由胰管上皮发展而来，且癌细胞比正常细胞粘着力弱，容易剥离而出现在胰液中，通过内镜下逆行胰胆管造影(ERP)收集胰液及胰管刷取液早期诊断晌癌是非常有他的。随着肿瘤分子生物学研究的不断深入，发现鹏胰腺癌的发生撇与多个基因的改变有关，它包括K-ras、p53、p16、DPC4基因及端粒酶等的改变，基因诊断给鹏癌早期诊断带来希望，研究已证明：胰腺癌最普遍的基因异常是 K-ras基因突变，而且几乎全部表现为12密码子点突变。近年来国外从舰细针穿刺(FNA)活检、胰液、十二指肠液、外周血和粪便等获取的标本中检测到K-ras基因第12密码子点突变，为胰腺癌的早期诊断提供了可能。但目前均限于回顾性分析，缺乏前瞻性研究。而端粒酶活性的检测在恶性肿瘤诊断中的作用正成为研究的热点，但在晌癌中研究较少．特别近年来发现位于染色体18q的DPC4基因在胰腺癌中缺失率较其它肿瘤为高也引起广泛关注。但国内此方面报道极少。因此，的究设计采用 BRCP下放置鼻胰管收集胰液以及用胰管细帆获朋取液和手术切除晌癌组织标本为研究对象，通过检测K-ras基因突变、端粒酶活性及基困的表达以及DPC4第8和第11外显子突变及基因的表达，探索通腑创的方法获得胰腺疾病患者胰液脱落细胞及胰管刷取细胞的方法，旨在探讨细胞学、端粒酶活性、K-ras基因及DPC4基因突变的检测及联合应用对胰腺癌早期诊断的价值，筛选出适合临床应用的胰腺癌早期诊断方法。一、胰腺癌胰液k-ras基因突变的检测 目的：探讨胰液的收集方法及胰液中 K-ras12密码子点突变对胰腺癌诊断的临床应用价值。 材料与方法：的究首次设计采用内镜下置鼻胰管方法收集了20例咖疾病的胰液并收集23例胰腺癌肿瘤组织标本，进行了胰液 2细胞学检查晰液中肿瘤标记物 CAIg刁及辟A的检测。同时采用聚合雌反应－限制性片段长度多态性分析uCR火FLP)和直接测序法检测了胰液和肿瘤组织的K下as基固第12密码子点突变，与肿瘤标i己物CA19刁及朋A比较，并评价其临床应用价值。 结果：鼻胰管收集T 24小时胰液量，胰腺癌、馒性胰腺炎患者分另为巴6士27m二(56一14om二)、ic2土2一m且(73一15om二)．胰腺癌胰液细胞学检查阳性率为｝3托门／12)，8例馒性胰炎均为阴性。胰腺癌组胰液cA19一9值(562o．58土ic64．88U／ml)与慢性胰腺炎组胰液加 19一 9值(5 018．6 off 0 21．2 4 U／ml)t匕较来见明显差别，而胰腺癌组胰液比A值(49．04土29．7o n吕／ml)明显高于厄性胰腺炎门．84 t 12．88 ng押)．12例胰腺癌胰液标本中 K－ras突变率为 58．3＄(7／12)；吕例馒 性胰腺炎 K一ras突变率为12．5％O乃厂胰腺癌胰液K呵as基因突变检测的敏感性为58．3人 特异性为88．9兄 阳性预示值为87．5兄 阴性预示值为61．5凡23 例胰腺癌组织标本中 卜ras 突变率为78．3X(18／23)10例癌周正常组织K一r巴s突变率为10X(1／10)．测序证明胰液 K、a s 突变形式与其同一患者来源的肿瘤组织相同。 结论：BRCP下置放鼻胰管方法收集胰液，方法简单，安全可靠，并可获取足量的胰液，但细胞学诊断阳性率较低；胰液中CBA对胰腺癌诊断和鉴别诊断具有一定的腑，而胰液中比 19刁的腑不大；K叶as基因突变与撇癌相关性最好，胰液中K了as 12密码子突变率高，特异性强，为胰腺癌早期诊断的初步筛选提供了手段．二、胰腺癌胰管刷检液和肿瘤组织端粒酶活性雌因表达的 研究 目的：探讨晌癌胰管刷检液和肿瘤组织端粒酶活性及其基固表达对胰腺癌早期诊断的价值。 材料与方法：本实验采用 ERCP T胰管刷检方法收集 2 7例帆疾病胰管刷检液，进行细胞学检查，并来用朗…－端粒重复扩增分析法－翩兔疫吸附试验uCRfRAP刁LISA)方法定量检测其端粒酶活性，同时对23例硼癌组织标抛测其端粒酶活性、原位杂交方法检测聊癌组织中端粒酶RNAuTR)和端粒娜化亚单位uTRT)的表达、免疫组化方法检测端粒贿自门RT)的表达，评价其对胰腺癌早期诊断的临床应用价值。 3 结果：27例胰管刷检细胞检查15例找到癌细胞，总阳性率为55．6儿诊断晌癌的特异性为100儿敏感性为65．2兄与BRCP相结合诊断正确率达100人 ．27例胰管刷检细胞标本共有21例进行了端粒酶活性的检测，其中 18例晌癌端粒酶活性吸光度(也。阻为 0．4 4 6LO．2？2，3例。馒性朋炎端粒酶活性A值为 0．041t0．011，无 1例端粒酶阳性，端粒酶活性以 A值列．2为阳性界限值，阳性率为77．78X，特异性 100X；23例晌癌组织端粒酶