成骨细胞损伤中H19及miR-675的表达

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目的:长链非编码RNA以及microRNA在疾病中细胞的分化、增殖等功能的调控作用,成为近些年研究的热点。H19是一种长链非编码RNA,miR-675是其外显子,前期课题组在骨损伤愈合过程中发现H19及miR-675促进骨细胞的增殖与分化,具有临床指导意义。骨质疏松疾病中的H19及miR-675没有相关研究。因此,本文旨在研究过氧化氢致成骨细胞损伤后细胞相应的功能变化及H19和miR-675的表达,揭示长链非编码RNA以及microRNA在成骨细胞损伤中的作用,对未来骨质疏松症的诊断与治疗提供有利的科学依据。方法:采用MC3T3-E1细胞的第三代作为实验研究对象,使用碱性磷酸酶和茜素红染色验证细胞具有分化能力;将细胞接种在96孔板,待其贴壁后加入(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、800μmol/L、1600μmol/L)的过氧化氢干预(2h、4h、8h)后,筛选出最适浓度和最佳时间。实验组为使用最适浓度和最佳时间过氧化氢处理组,对照组不做任何处理。实验组和对照组在处理后的0h、24h、48h、72h用CCK8测得OD值,在0h、24h用显微镜下观察细胞形态,48h进行碱性磷酸酶染色,0h进行流式细胞仪检测细胞凋亡的比例,0h、24h、48h检测细胞的H19以及miR-675的表达情况。结果:(1)本次实验中所用到的实验对象MC3T3-E1细胞系具有成骨细胞的分化能力。(2)选取400μmol/L的浓度干预4h用来建立成骨细胞损伤,成骨细胞损伤组的增殖曲线与对照组相比有显著性差异(P<0.001),且细胞凋亡率显著高于对照组的(P<0.001)。损伤组的成骨细胞无显著性增殖(P>0.05),且早期凋亡率显著高于晚期凋亡率。(3)实验组的H19和对照组的H19在成骨细胞损伤建立的24h、48h均有显著性差异(P<0.05),在0h没有差异(P>0.05);对照组在3个时间段中,24h的miR-675表达无显著性变化(P>0.05)。但在成骨细胞损伤组和对照组中,0h和24h(P<0.05)、24h和48h(P<0.001)的miR-675的表达有显著性差异(P<0.05),均有统计学意义。结论:在正常成骨细胞增殖和分化过程中,miR-675参与成骨细胞的正向调控,且与H19存在负向调控的关系,在成骨细胞损伤中也是如此。在成骨细胞的损伤导致的细胞凋亡过程中,H19和miR-675可以作为一种骨质疏松发展期的生物标记,但H19对成骨细胞早期凋亡的判断无明显的作用。H19可作为鉴别骨质疏松的一种生物标记,而miR-675可作为治疗骨质疏松的一种生物标记。
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