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目的:
1.研究大鼠急性肺栓塞后肺部炎症反应的机制;
2.研究中药单体白藜芦醇对急性肺栓塞大鼠肺部炎症反应的干预作用。
方法:
96只SD大鼠按完全随机设计分为正常对照组(N组),溶剂对照组(D组),血栓栓塞组(T组),白藜芦醇+栓塞组(TR组),各组分1h、4h、8h3个时间点组,分别为N1、N4、N8组,D1、D4、D8组,T1、T4、T8组,TR1、TR4、TR8组,每组8只。采用大鼠自体血凝栓回输体内(导管经右颈静脉插至肺动脉)复制急性肺血栓栓塞模型。所有各组大鼠均接受手术及插管处理。N组于相应时间点大鼠尾静脉注入等量生理盐水:D组大鼠尾静脉注射等量1%二甲基亚砜(DMSO)溶液(DMSO用生理盐水稀释成1%的DMSO溶液);T组大鼠输入血栓复制急性肺栓塞模型;TR组大鼠在输入血栓复制急性肺栓塞模型后,立即予尾静脉注射白藜芦醇溶液10mg/kg(白藜芦醇溶于1%的DMSO溶液)。按改良右心导管法制备急性肺栓塞模型。各组大鼠右心房取血(10ml注射器右心房缓慢取血5-8ml)室温静置10min后4000rm/min、4℃离心10min分离血浆,用ELISA法检测大鼠血浆单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化;取大鼠左肺中下叶用10%多聚甲醛液固定,石蜡包埋切片,用于大鼠肺组织HE染色、免疫组化法检测MCP-1、激光共聚焦显微镜下采用免疫荧光法检测磷酸化p38的表达;取大鼠右肺及左下肺装入DEPC水处理的冷冻管-70℃保存,用于RT-PCR检测肺组织MCP-1mRNA及westernblot检测肺组织磷酸化p38的变化。
结果:
1.肺组织HE染色结果显示:N、D组各时间点组大鼠肺内炎症细胞数较少;急性肺栓塞组各时间点组大鼠肺内可见大量炎症细胞;TR1组大鼠肺组织内炎症细胞数较T1组无明显差异(P>0.05),TR4组、TR8组大鼠肺组织内炎症细胞数分别较T4组、T8h组为少(P<0.05)。
2.血浆ELISA检测MCP-1和TNF-α结果显示:(1)MCF-1检测结果:T组、TR组各时间点大鼠血浆MCP-1分别较N、D组各时间点无统计学意义(P>0.05)。(2)TNF-α检测结果:T1组大鼠血浆TNF-α较N1、D1组无统计学意义(P>0.05),T4、T8组大鼠血浆TNF-α分别较N、D组相应时间点有统计学意义(P<0.05),T1、T4、T8组间TNF-α表达量随时间而增高;TR1组大鼠血浆TNF-α的表达量较T1组无统计学意义(P>0.05),TR4、TR8组大鼠血浆TNF-α的表达量分别较T4、T8组为低(P<0.05)。
3.免疫组化和免疫荧光检测肺组织石蜡切片显示:急性肺血栓栓塞组大鼠肺组织MCP-1、磷酸化p38明显表达。
4.WesternBlot检测肺组织磷酸化p38显示:T组各时间点大鼠肺组织中磷酸化p38的量分别较N、D组各时间点为高(P<0.05),T组各时间点大鼠肺组织中磷酸化p38的量与时间成正相关;TR1组大鼠肺组织中磷酸化p38的量较T1组无统计学意义(P>0.05),TR4、TR8组大鼠肺组织中磷酸化p38的量分别较T4、T8组为低(P<0.05)。
5.RT-PCR检测肺组织MCP-1mRNA显示:T组各时间点大鼠肺组织中MCP-1mRNA的量分别较N、D组各时间点为高(P<0.05),T组各时间点大鼠肺组织中MCP-1mRNA的量与时间成正相关;TR1组大鼠肺组织中MCP-1mRNA的量较T1组无统计学意义(P>0.05),TR4、TR8组大鼠肺组织中MCP-1mRNA的量分别较T4、T8组为低(P<0.05)。
结论:
1.急性肺栓塞可引起大鼠肺部炎症细胞浸润和炎症介质释放;
2.急性肺栓塞大鼠可能通过激活肺组织p38MAPK信号转导通路上调MCP-1的表达,从而促进炎症细胞在大鼠肺部聚集并释放炎性介质而加重肺损伤;
3.中药单体白藜芦醇可能通过抑制肺栓塞大鼠肺组织p38MAPK信号转导通路降低MCP-1的表达,从而抑制急性肺栓塞大鼠肺部炎症细胞聚集并减少炎性介质释放,而起到保护肺组织的作用。