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水稻纹枯病是水稻上最重要的病害之一,病原菌为立枯丝核菌Rhizoctonia solani Kuhn。目前对其致病机理及分子生物学水平上的研究报道甚少。通过对水稻纹枯病菌进行遗传转化,构建病菌突变体库,对探讨致病机制、克隆致病相关基因有重要意义。病原菌原生质体的制备和再生是进行遗传转化的前提和关键。本研究选用来源于广东省水稻纹枯病菌的强致病力菌株GD-118,对其原生质体制备和再生条件进行了探索,并参照稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)原生质体遗传转化体系对立枯丝核菌进行了遗传转化。此外,对来自浙江省的共224份水稻品种和江西省的100份水稻纹枯病菌菌株进行了抗病性及致病性鉴定,研究结果如下：1.不同菌株致病性差异利用水稻标准品种Jasmine85(抗)、91SP(抗)、C418(抗)、Lemont(感)和武育粳(感)对100份纹枯病菌进行致病力测定。经统计分析,表明不同菌株的致病力具有一定差异：Y-144、Y-12、Y-22、Y-116等表现为相对较强的致病力；Y-70、Y-17、Y-81、Y18等的致病力相对较弱。2.不同水稻品种抗病性差异利用致病力不同的纹枯病菌标准菌株C30(强)、GD-118(强)、E67(中)、YN-7(中)和YN-3(弱)对来自浙江省水稻品种224份进行田间试验和统计分析,发现Z7334、G07-76、浙农68、甬灿707、嘉早7308、温718等抗性较强。3.水稻纹枯病菌原生质体制备条件优化本文对不同胞壁降解酶及其组合进行了试验,明确15mg/mLGlucanex和10mg/mLLywallzyme的混合酶处理菌丝6h,可高效降解水稻纹枯病菌细胞壁并获得大量原生质体,原生质体产量达3-3.5×107个/g菌丝(即6-7×106个/mL),且对不同致病力的水稻纹枯病菌株E67、C30、YN-7和YN-3均有较好的降解作用。4.水稻纹枯病菌原生质体转化参照稻瘟菌原生质体转化方法,用质粒PCB1003、pTHPR1转化水稻纹枯病菌原生质体,20μg/mL的潮霉素作为转化的选择筛选浓度,能够获得转化子,但潮霉素抗性不能稳定遗传。