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本研究以新鲜牦牛血为原料，运用单因素、正交试验设计、响应面分析法对凝血酶的提取、激活工艺进行了优化；运用DEAE-52离子层析和sephadex G-75凝胶过滤层析对凝血酶进行了分离纯化，并对凝血酶的稳定性进行了研究。结果如下：(1)等电点沉淀法提取牦牛血中凝血酶的最优工艺参数：血浆9倍稀释、HAc浓度3%、pH5.3，在此条件下凝血酶的比活为2.19U/mg，提取率为56.71%。(2)柠檬酸钡吸附法提取牦牛血中凝血酶最优工艺参数：氯化钡添加量为原血浆体积12%，在此条件下凝血酶的比活为6.34U/mg，提取率为65.15%。(3)通过两种提取方法的比较，得出柠檬酸钡吸附法优于等电点沉淀法，酶比活为6.34U/mg，总酶活为1635.29U。(4)单独Ca2+激活牦牛血凝血酶原最优工艺参数：激活温度27℃、Ca2+终浓度0.01mol/L、激活时间1.95h，在此条件下，凝血酶比活为6.34U/mg。(5)采用DEAE-52离子交换层析对凝血酶粗品进行纯化，纯化倍数16.52，回收率76.21%；采用sephadex G-75凝胶过滤层析对凝血酶进一步纯化，纯化倍数29.21，回收率57.75%。对纯化后凝血酶进行纯度鉴定，电泳条带呈单一条带，已达到电泳纯，分子量约为37kd。(6)凝血酶在温度4-37℃、pH6-8范围内相对稳定；金属离子K+、Ba2+、Mg2+、Mn2+、Fe2+及有机溶剂甲醇、乙醇、乙二醇对凝血酶均有不同程度的抑制作用；该酶在低温下较稳定。综上所述，柠檬酸钡提取牦牛血凝血酶的方法优于等电点沉淀法，Ca2+能很好达到激活凝血酶的目的，通过DEAE-52离子交换层析和sephadex G-75凝胶过滤层析可得到电泳纯的凝血酶，该酶不耐热不耐酸碱，可被金属离子和有机溶剂抑制，分子量约为37KD。牦牛血液有潜力成为凝血酶提取的重要来源。