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β-hCG单克隆抗体对早期妊娠以及滋养层细胞肿瘤等的诊断、鉴定具有重要的价值,将其片段化有利于改善单克隆抗体分子量大、组织的穿透力差、容易产生种属之间的排斥反应等特性。为此,本课题开展了固定化木瓜蛋白酶制备β-hCG单克隆抗体片段的研究,主要研究了温敏性固定化木瓜蛋白酶的制备及其性质、抗体片段的制备以及片段的分离纯化。首先,以温敏性材料N-羟基琥珀酰亚胺活化的聚(N-异丙基丙烯酰胺)为载体制备了具温敏性的固定化木瓜蛋白酶,在给酶量为0.6 mg/mg载体,22℃、pH 8.5的溶液中反应6 h制得的固定化酶活力最高,达84.7 U/mg;固定化酶的最适pH为7.5,最适温度为65℃,米氏常数为2.72 mg/mL;经过24次温敏循环操作,剩余相对活力86.6%;在4℃条件下放置60 d,剩余相对活力为71.5%。与游离酶相比,固定化酶pH稳定性、热稳定性、操作稳定性和储存稳定性都有显著提高。然后,将温敏性的固定化木瓜蛋白酶应用于β-hCG单克隆抗体的消化,对消化条件进行了优化,结果表明:在pH 7.0,温敏载体固定化木瓜蛋白酶与抗体比为50:1(U/mg),消化温度为30℃,消化时间为6h的条件下制备所得的抗体F(ab’)2片段最多。与纤维素固定化酶相比,温敏性的固定化木瓜蛋白酶的水解抗体能力更强,更适合于大分子的酶解,特别是抗体片段的制备。最后,通过凝胶过滤层析、蛋白L亲和层析、蛋白A-蛋白L亲和层析等方法对抗体片段进行纯化。经凝胶过滤层析纯化后F(ab’)2片段的纯度为80.1%,得率为51.2%;经蛋白L亲和层析纯化后F(ab’)2片段纯度为82.7%,得率为46.5%;经蛋白A-蛋白L亲和层析纯化后,抗体F(ab’)2片段的纯度可达98.4%,得率为38.3%;3种方法纯化所得片段的生物学活性良好。本研究为抗体片段在生物和医药领域的应用建立了一定的技术基础,并为其它单克隆抗体片段的制备及纯化提供了一定的参考价值。