目的：大黄酚(Chrysophanol,Chry)化学名为1，8-二羟基-3甲基葸醌(1，8-dihydroxy-3methyl anthraquinone)，属于羟基蒽醌类，分子量为254．23，是大黄(rhubarb)的有效成分之一。国内外文献有关大黄的报道很多，其作用极其广泛。早期药理研究表明，大黄有抗菌、泻下、抗高脂血症、降低血压、抗肿瘤等作用，现代药理实验研究证实大黄还具有改善肝肾功能、消炎利胆、保护胃肠粘膜及肺功能、抑制血栓形成、防止冠心病发生等作用。特别是近年来实验研究表明，大黄具有抗衰老作用，能清除氧自由基、抑制胆碱酯酶、增强血及脑组织中超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathioneoeroxidase,GSH-px)活性，改善学习记忆障碍，所以大黄是一种极具开发价值的药用植物。而作为大黄有效成分之一的大黄酚，也有多方面的作用，已有报道其可抑制脂质过氧化，减少氧自由基生成、抗炎等，而上述作用均对学习记忆减退有改善作用。但其对Aβ造成小鼠衰老模型的学习记忆改善作用尚未报道。 痴呆(dementia)是一组临床症状，是在无意识障碍时的记忆障碍和认知功能缺损。与年龄增长伴行的认知功能障碍即老年性痴呆(senile dementia,SD)是多种原因引起的老年性神经系统退行性改变。阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是老年性痴呆的一种，亦即老年性痴呆阿尔茨海默型(seniledementia ofAlzheimer type,SDAT)。AD主要临床表现为患者智力、记忆力及认知功能进行性下降。其主要神经病理特征是大脑皮质的萎缩、细胞外存在的大量老年斑(senileplaques,SP)和神经细胞内的神经纤维缠结(nuerofibrillarytangles,NFT)以及皮质动脉和小动脉的血管淀粉样变性。SP又称为轴索斑，其核心是β淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)。Aβ可引起神经细胞损伤、死亡，造成实验动物记忆障碍，因此阻断或延迟Aβ的早期积聚成为治疗AD的切入点。本课题拟采用Ap25.35侧脑室注射造成AD动物模型，同时采用避暗法和Morris水迷宫法观察大黄酚对Aβ所致AD动物学习记忆障碍的改善作用，以及测定动物脑组织一氧化氮(nitric oxide,NO)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthese,NOS)含量，并通过光镜、电镜实验观察Aβ、大黄酚对动物海马结构的影响，探讨大黄酚改善学习记忆的可能机制，为AD的有效治疗提供新的药物。 方法：♂昆明种小鼠1 00只，随机分成5组：生理盐水(NS)对照组，Aβ<,25-35>模型组，大黄酚(10.0，1.0,0.1 mg·kg<'-1>)组。d l，生理盐水对照组icv NS 3μL，其它各组icv Aβ<,25-35> 3μL(1 mmol·L<'-1>)。icv后立即ip：生理盐水对照组和Aβ<,25-35>模型组分别ip溶剂O.1 mL·10g～；大黄酚(10.O，1.O，O.1 mg·kg<'-1>)组ip大黄酚(1.00,0.10,0.01.g L<'-1>)O.1 mL·10g<'-1>。d 2-d 17，各小鼠每天ip一次；d 8-d 17，每天ip后60 min进行各项实验。 d8-d16进行学习记忆行为学实验，观察大黄酚(10.0，1.0,0.1 mg·kg<'-1>)对Aβ<,25-35>造成记忆障碍的改善作用。d8，避暗实验(step through test)，电脑自动记录180 s内小鼠进入暗室的潜伏期和错误次数。24 h后以同样方法记录小鼠错误次数和潜伏期，测验小鼠记忆成绩。d 11-d 15，Morris水迷宫隐藏平台获得实验(The test of gaining concealedplatform)，每只小鼠每天训练4次，每次训练120 s，连续5天。记录小鼠寻找站台的潜伏期、游泳路径长度及所采取的搜索策略。d 16，Morris水迷宫空间搜索实验(spatial probetest)，将可移动位置的圆柱形透明有机玻璃站台从水池中取出，水深不变。每只小鼠训练4次，每次采用不同的入水点，记录小鼠120 S穿越站台所处位置的次数。d17，测定小鼠脑组织NO，NOS和诱导型一氧化氮合N(inducible nitric oxide synthase，iNOS)含量。将小鼠快速断头取脑，制成10％脑匀浆。取适量上清液按试剂盒说明进行NO、NOS、iNOS活性测定。 另取♂昆明种小鼠50只，随机分成5组，分组、给药同上。d 16，小鼠断头取脑，采用常规HE染色及铀一铅染色并制备切片，分别在光镜和电镜下观察小鼠海马区的病理改变。 结果： 1 Aβ<,25-35>对小鼠避暗实验的影响及大黄酚的保护作用结果表明：Aβ<,25-35>可造成记忆障碍，模型组与NS组相比小鼠进入暗室潜伏期缩短、错误次数增加、错误百分率增加；而大黄酚(10.0，1.0，0.1 mg·kg<'-1>)均可不同程度地改善Aβ<,25-35>所致学习记忆障碍。 2 Aβ<,25-35>对小鼠Morris水迷宫实验的影响及大黄酚的保护作用 2.1 隐藏平台获得实验结果表明：Aβ<,25-35>造成了小鼠空间学习记忆能力的障碍，随着训练天数的增加，各实验组潜伏期、游泳路径长度均不断缩短。模型组与NS组相比潜伏期、游泳路径显著延长；而大黄酚(10.0，1.0，0.1 mg.kg<'-1>)均可不同程度地改善Aβ<,25-35>所致空间学习记忆障碍。在训练开始时，各组小鼠主要以边缘式和随机式策略寻找站台；随着训练次数逐渐增加，这两种搜索策略的出现率逐渐下降，而NS组和各剂量大黄酚组的下降速度和程度较模型组快；相反，趋向式和直线式搜索策略增加，NS组和各剂量大黄酚组的上升速度和程度较模型组快。 2.2 空间搜索实验结果显示：Aβ<,25-35>造成了小鼠空间学习记忆能力的障碍，而大黄酚(10.0，1.0，0.1 mg·kg<'-1>)不同程度地改善了Aβ<,25-35>所致的空间学习记忆障碍。模型组与NS组相比穿越平台区域次数减少，而大黄酚(1 0.0，1.0,0.1mg·kg<'-1>)组与模型组相比穿越平台区域次数增加。 3 大黄酚对小鼠脑组织NO含量，总NOS和iNOS活性的影响结果显不：icV Aβ<,25-35> 3μL(1 mmol·L<'-1>)后17d，可引起小鼠脑组织NO含量增加和总NOS、iNOS活性升高(P<0.01)；而连续给予大黄酚(10.0，1.0,0.1 mg.kg<'-1>)17d，均可降低小鼠脑组织中NO含量及总NOS、iNOS活性(P<0.01)。 4 Aβ<,25-35>脑内定位注射引起的脑内神经形态病理学变化及大黄酚的改善作用 4.1 光镜实验结果显示：NS组海马区神经元结构正常；模型组海马区出现结构不清、外形不规则的神经元，神经元间有宽窄不等的间隙；大黄酚(10.0，1.0，0.1 mg·kg<'-1>)组上述病理学改变不同程度减轻。 4.2 电镜实验结果显示：NS组神经元、神经纤维超微结构正常。模型组神经元细胞器减少，并见脂褐素样小体，有些神经元呈现凋亡早期改变，另外可见神经纤维肿胀；大黄酚(10.0，1.0，0.1 mg·kg<'-1>)组上述病理学改变不同程度减轻。 结论： 1 一次性icv聚集态Aβ<,25-35> 3 μL可造成动物学习记忆障碍，而大黄酚(1 O.0，1.0，0.1 mg·kg<'-1>)可不同程度地改善hi325.35造成的学习记忆障碍。 2 一次性icv聚集态Aβ<,25-35> 3 μL可引起脑组织神经病理改变，而大黄酚(1 O.0，1.0，0.1 mg·kg<'-1>)对Aβ<,25-35>所致的脑组织神经病理形态异常改变有不同程度的对抗作用。 3 一次性icv聚集态Aβ<,25-35> 3 μL后17天能引起小鼠脑组织NO含量增加和总NOS、iNOS活性升高(P<0.01)，大黄酚(10.0，1.0，0.1 mg·kg<'-1>)均可降低小鼠脑组织中NO含量及总NOS、iNOS活性(P<0.01)，可见大黄酚能改善由Ap25.35所致的学习记忆障碍可能与其抑制iNOS/NO参与的在体条件下对Aβ<,25-35>神经毒性的介导有关。