论文部分内容阅读
目的： 富血小板血浆（Platelet-rich Plasma,PRP）是通过血液分离技术而得到的血小板浓集物，激活后能释放高浓度的生长因子，这些生长因子在细胞增殖、血管和组织再生中发挥重要作用，具有促进骨组织和软组织生长的作用，在口腔临床医学方面的应用几乎涉及了包括口腔种植，齿槽外科，颌面外科，牙周手术，牙髓保存等各个领域。目前PRP的使用仍然局限于自体血采集制备和即刻应用，患者在采血后，PRP必须立刻制备和用于术区，这样就有了空间和时间的限制，因此需要有长期有效保存PRP的方法。本研究拟通过实验观察比较PRP在低温冷冻前后生长因子释放量的变化以及在兔颅骨缺损修复中的效果，为低温冷冻PRP的应用提供理论依据。 方法： 2.5kg健康新西兰雄性大白兔15只，每只兔子制备PRP1ml，平均分为两份，一份激活后测定生长因子的含量，另外一份低温冷冻保存，复温后再激活测定生长因子含量，比较分析两份PRP冷冻前后血小板（PLT）数量，平均血小板体积（MPV）和血小板分布宽度（PDW）的变化，以及激活后释放生长因子含量的差异。通过体内研究验证生长因子的活性，将15只兔子随机分为4周、8周、12周三个时间组，每组5只动物；使用戊巴比妥钠（30mg/kg）经耳缘静脉注射麻醉动物后，做垂直于两眼内眦连线中点约5cm长的纵形切口，切开皮下组织和肌层直达骨膜，沿颅顶中线用取骨钻制备3个直径7mm、间距3mm的圆形全层骨缺损，3个缺损孔内分别填入低温冷冻自体PRP凝胶+羟基磷灰石/磷酸三钙复合体（Hydroxyapatite/Tricalcium Phosphate,HAP/TCP）（实验孔），生理盐水+HAP/TCP（空白孔）和新鲜自体PRP凝胶+HAP/TCP（对照孔），充填物与骨面齐平，严密缝合骨膜，关闭伤口；于术后4周，8周，12周各处死一组动物，取材后肉眼观察大体成骨情况、X线检查骨缺损区新骨密度的变化、CT扫描测定成骨区域的CT值，并进行统计学分析，最后将经甲醛固定后的样本置于10%乙二胺四乙酸（Ethylene Diamine Tetraacetic Acid,EDTA）溶液中脱钙，石蜡包埋、制备5μm厚的切片，常规HE染色后光镜下观察成骨情况。 结果： 经过统计学分析，低温冷冻PRP复温激活后释放的生长因子含量与新鲜PRP比较无显著差异。术后7天拆线，所有动物软组织愈合良好，未见明显炎症反应。术后4周：肉眼观察三个缺损孔内均未见明显的新鲜骨质生成，X线摄片显示，所有缺损边界清晰锐利，组织学观察各孔均可见有类骨组织及骨小梁形成，实验孔和对照孔明显比空白孔多；术后8周：所有缺损区均见有新鲜骨质生成，实验孔和对照孔均边界不清，空白孔缺损边界仍清晰可见，X线摄片显示，缺损的范围有所缩小，特别是实验孔和对照孔的缺损范围缩小明显，且边界不清，实验孔和对照孔的缺损区密度均高于空白孔，组织学观察各孔形成的骨组织明显增多，HAP/TCP复合物开始降解吸收，实验孔和对照孔新生骨小梁粗大，致密，且数量比空白孔多；术后12周：各孔的缺损区域基本修复，颜色、外观与周围正常骨组织的区别不大，X线摄片显示，无明显的骨缺损边界影像，实验孔和对照孔密度均匀，与周围正常骨组织区别不大，空白孔中央密度相对较低，组织学观察各组新生骨均趋于成熟，HAP/TCP复合物降解明显，但仍可见残余颗粒，新生骨结构与周围颅骨相仿，骨小梁粗大，并可见层板状骨。CT值统计学分析结果表明，随着成骨时间的延长，三个骨缺损孔内新生骨CT值有不断增加的趋势，经三个时间组的组间比较，CT值差异均有统计学意义；同一时间组内，三个缺损孔的成骨情况也有不同程度的差异：术后4周，实验孔与对照孔相比，CT值差异无统计学意义，但实验孔、对照孔与空白孔相比，CT值差异均有统计学意义；术后8周，实验孔与对照孔CT值相比，差异无统计学意义，但实验孔、对照孔CT值均明显高于空白孔，差异有统计学意义；术后12周，实验孔、空白孔、对照孔的骨密度均接近周围正常骨组织，三孔的CT值差异无统计学意义。 结论： 本实验结果表明，低温冷冻保存的PRP复温后释放的生长因子含量和新鲜PRP释放的生长因子含量差异不大，而且通过动物实验表明释放的生长因子活性没有变化，激活后同样具有促进骨组织生长的作用。根据本实验结果，如果能在无偿献血采血的同时，制备PRP，建立低温个人PRP储存库，随用随取，将有利于骨缺损患者尽早恢复形态和功能的需求。