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目的：1.研究人甲型H3N2流感病毒Aichi株(A/Aichi/2/68, H3N2)在BALB/c小鼠肺-肺模型上的适应过程。2.制备银翘散水煎剂冻干样品并进行含量控制,为探讨银翘散抑制流感病毒机理提供物质基础。3.考察银翘散样品体外抗甲型流感病毒H3N2的作用,比较细胞病变抑制法和空斑减少试验不同适用条件。4.探讨银翘散样品体内抑制甲型流感病毒H3N2复制作用及途径。方法：1.以人类流感病毒株A/Aichi/2/68(H3N2)鼠肺-肺连续传代6次建立鼠肺适应株,比较每代适应株小鼠生存状态、肺指数、病毒滴度及血凝效价的改变,取第0、第6代鼠肺悬液进行NS1蛋白测序,找到野生株转变为适应株的突变氨基酸,探明突变发生过程中的关键事件。2.采用高效液相色谱法分别测定银翘散中3味中药金银花、牛蒡子、甘草酸中绿原酸、牛蒡子苷、甘草酸含量,对自制银翘散水煎剂冻干样品进行质量控制。3.细胞培养测定抗病毒效果。以细胞病变抑制法和空斑减少试验法,在不同试验策略(治疗、保护)下,评价银翘散体外抗流感病毒H3N2作用,比较2种方法不同适用条件。4.H3N2鼠肺适应株滴鼻感染BALB/c小鼠,观察生存状态及检测肺指数；以苏木素-伊红染色(HE染色)法观察病理改变；透射电镜观察肺泡超微结构改变及病毒感染情况；将鼠肺悬液以空斑减少试验定量检测感染性病毒滴度,蛋白免疫印迹技术(western blot, WB)检测核蛋白(nucleoprotein, NP)表达。结果：1.第1代-第2代小鼠生存状态、鼠肺大体病变、肺指数、病毒滴度及血凝效价结果与正常对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)；第3代-第4代小鼠肺指数、病毒滴度及血凝效价逐渐升高；第5代、第6代小鼠出现耸毛,蜷缩,少食,少动,呼吸急促,进食、饮水量骤减,体重减轻等明显感染症状,鼠肺出现逐渐加重的水肿、淤血,呈肺肝样变,肺指数、病毒滴度、血凝效价结果与正常对照组比较,差异显著(P<0.01)；第6代鼠肺适应株NS1蛋白125位甘氨酸突变为天冬氨酸。2.银翘散水煎剂冻干样品质控系统具有良好的稳定性和可重复性,受试样品中绿原酸、牛蒡子苷、甘草酸的含量符合现行药典标准。3.体外抑制实验中,4～32mg/mL银翘散样品在治疗及保护模式下,均有较好的抑制病毒、提高细胞存活率的作用(P<0.01)；空斑减少试验结果显示4mg/mL银翘散样品两种模式SI分别为39.31及43.48,能有效抑制流感病毒,符合CPE的结果。4.体内实验结果显示,银翘散大剂量(5g/kg)可以减轻全身症状,降低肺指数;改善鼠肺病变,范围<50%;减少肺泡腔渗出物、肺泡微细结构改变及病毒颗粒数量;降低鼠肺病毒滴度及鼠肺流感病毒核蛋白表达量,与模型对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：1.该适应株模型提供了一个了解甲型流感病毒跨物种适应性的研究工具,不仅阐述了野生型流感病毒株在新宿主上产生适应性的过程,为探索适应过程中的病毒与宿主的分子变化打下基础,也为后续药理研究建立了平台,对于评价药物对H3N2流感病毒治疗效果及其作用机制具有重要意义。2.银翘散冻干样品可以有效保护水煎液中有效成分,与传统剂型相比,易于标准定量,操控性强,适合进行药理及作用机制研究。4.银翘散样品体外有抗甲型流感病毒H3N2的作用；MTT法适用于抗病毒药物初步筛选,而空斑减少试验适用于精确测定药物抗病毒活性。5.银翘散样品体内有抑制甲1型流感病毒H3N2复制的作用,主要作用于病毒复制早期抑制NP蛋白合成过程中。