基于谷胱甘肽金纳米簇聚集诱导作用荧光探针的研究

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金纳米簇是近年来兴起的一种新型的超小纳米材料,具有优异的发光性能、低毒性、良好的生物相容性、容易合成和易于表面修饰等优点,被广泛的作为荧光探针应用于生物检测。检测的主要机理是基于金纳米簇与目标分析物之间的相互作用引起荧光信号的变化。在本论文中我们合成了谷胱甘肽保护的金纳米簇,利用其聚集诱导发光的性质,通过引入合适的中间反应物,分别构建针对酸性磷酸酶和葡萄糖的高灵敏传感方法。酸性磷酸酶(ACP)是一种在酸性条件下能水解单磷酸酯的酶。在植物体内ACP参与磷元素的代谢,在动物体内除了水解单磷酸酯外还催化磷酸基团的转移。人体血清中酸性磷酸酶的改变不仅仅见于前列腺疾病的产生,可能会伴随其他疾病的发生,例如骨骼疾病、肝脏疾病和血液系统疾病等。临床上测定血清ACP主要用于诊断前列腺癌,因此,检测酸性磷酸酶的活度具有重要的意义。本论文的第一部分,我们利用谷胱甘肽型的金纳米簇作为探针在三价铈离子的作用下聚集诱导发光增强,采用抗坏血酸磷酸三钠作为底物,在酸性磷酸酶的作用下水解产生抗坏血酸,还原四价铈离子生成三价铈离子,使纳米簇聚集发光增强。基于此,我们建立了一种高灵敏检测酸性磷酸酶活度的方法,线性范围是0.005-2.4 U/L,检测限可达0.001 U/L,该探针成功用于血清实际样品的检测。人体内葡萄糖的含量与人的各项生理活动密切相关。目前,糖尿病患者不断增加,糖尿病也是目前世界上致死率最高的疾病之一。因此精确地检测血糖含量达到正确诊断显得格外重要。在本文的第二部分,我们以谷胱甘肽金纳米簇作为荧光探针,通过实验,我们发现三价铈离子能使谷胱甘肽金纳米簇聚集荧光增强,而过氧化氢能氧化三价铈离子成为四价铈离子,高价铈离子不具有聚集作用,从而不会使荧光强度发生变化。在之后的葡萄糖的酶促反应中,通过葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖产生H2O2实现对葡萄糖的检测,检测限可达到0.08 μM,该方法具有良好的选择性及准确度,可以用于实际血清样品的检测。
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