油松花粉蛋白质酶水解制小肽的工艺研究

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论文选择了乙醇、正己烷、水为提取溶剂,研究了不同溶剂条件对黄酮、不饱和脂肪酸和总产量的影响,在m乙醇:m正己烷=7:3和1:1时复合营养物的提取分别作了单因素试验,得出提取复合营养物的适宜条件为:(1)乙醇:正己烷=7:3时,温度50℃,反应时间3h,固液比1:10;(2)乙醇:正己烷=1:1时,温度50℃,反应时间3h,固液比为1:20。对复合提取物中的不饱和脂肪酸进行了液相色谱定性测定。本论文选取温度、乙醇浓度、固液比三个因素进行黄酮提取条件的优化,得出提取黄酮的最佳工艺条件:溶剂为70%乙醇,温度为70℃,液固比为20。用NaNO2-Al(NO33-NaOH显色法测定总黄酮的产量为1.41%。采用响应面实验设计方法(RSD)对油松花粉中总黄酮提取工艺进行优化。其最优提取条件为:温度为80℃,溶剂乙醇浓度为56%,液固比为17.9,加热3.2h回流提取。在此条件下,测定总黄酮的产量为1.49%。采用定磷法,测定油松花粉中的总核酸为0.66%。利用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和双酶水解对油松花粉蛋白质进行水解制备小肽,确定了小肽的最佳水解条件:碱性酶水解:温度50℃、底物浓度4.5%、pH=10、水解时间2小时、酶浓度4000u/g。在此条件下,水解液的氮溶指数为80.30%。木瓜酶水解:温度为45℃、底物浓度为4.5%、pH值为6.5、水解时间为2小时、酶浓度为3000u/g。在此条件下,水解液的氮溶指数为41.63%。复合酶水解:温度为45℃、底物浓度为4.5%、pH值为9、木瓜酶水解时间为2小时、碱性酶与木瓜酶的比例为1:1。在此条件下,水解液的氮溶指数为69.75%。测定水解液清除·OH自由基的能力,碱性蛋白酶水解液的抑制率为40.57%,木瓜蛋白酶水解液的抑制率为29.25%,双酶水解液的抑制率为74.84%。同时测定水解液抗氧化活性AOV,碱性蛋白酶水解液的抗氧化活性为0.068mg/ml,木瓜蛋白酶水解液的抗氧化活性为0.034mg/ml,双酶水解液的抗氧化活性为0.119mg/ml。
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