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肝癌严重威胁着我国人民生命健康。基因-病毒治疗是继手术、放疗、化疗之后，肝癌靶向治疗的一种非常有前景的生物治疗方案。其中，溶瘤腺病毒本身具有裂解肿瘤的能力，又能介导外源基因高效表达，已成为基因-病毒治疗领域重要载体。目前已建立多种腺病毒调控策略，使其特异杀伤肿瘤细胞，而对正常组织细胞基本无毒性。然而，野生型腺病毒对肝脏具有较强的嗜性，如何减少甚至避免腺病毒对正常肝细胞的毒性，仍是应用腺病毒作为载体开展肝癌基因-病毒治疗所面临的巨大挑战。microRNA（miRNA）是生物体内源，长度约为19-25个核苷酸的非编码小RNA，它能通过与靶基因mRNA上的靶序列互补配对结合，在转录后水平对基因表达起负调控作用，导致mRNA的降解或翻译抑制。研究表明，miRNA具有高度的时空表达特异性，一些特定的miRNA常在一类肿瘤细胞（如肝癌）中异常下调，与肿瘤发生发展关系密切。因而，可以根据microRNA的调控方式与表达特点，将miRNA引入溶瘤腺病毒的靶向性调控中，即利用肝癌细胞特异性下调的miRNA调控腺病毒增殖必需基因E1A的表达，使其在相应miRNA高水平表达的正常肝细胞内不增殖（E1A被抑制），而在相应miRNA表达缺失的肝癌细胞内有效增殖（E1A正常表达），从而特异杀伤肝癌细胞，避免对正常肝细胞的毒副作用。miR-199a/b-3p是正常肝细胞内一种表达量非常高的miRNA（绝对表达量居第三），且在多种类型组织中高水平表达。研究发现，miR-199a/b-3p在肝癌细胞内广谱低水平表达。在本研究中，我们将miR-199a/b-3p靶序列插入E1A的3’非翻译区中，同时将5型腺病毒纤毛替换为5/35型嵌合纤毛，以提高病毒对肿瘤细胞的感染效率，建立基于miR-199调控靶向肝癌细胞的溶瘤腺病毒载体系统。通过Westernblotting、RT-PCR等技术研究在该调控方式作用下，腺病毒E1A的表达情况；通过病毒增殖实验、绿色荧光报告系统等手段检测病毒的增殖特性；应用MTT法检测病毒对肝癌细胞的体外杀伤作用及对正常肝细胞的毒副作用；建立肝癌细胞裸鼠移植瘤模型，研究病毒对移植瘤的抑制作用。结果表明，包含8个拷贝miR-199a/b-3p靶序列的溶瘤腺病毒SG7035199T能在miR-199a/b-3p低表达的肝癌细胞株（Hep3B与Huh7）中有效增殖并发挥杀伤作用，病毒感染后E1A能正常表达；而在miR-199a/b-3p高表达的正常肝细胞株（L02）及卵巢癌细胞株（SK-OV3）中基本不增殖，基本不发挥杀伤作用，病毒感染后E1A被有效抑制。而对照病毒，如包含5/35型嵌合纤毛，不具有任何调控的增殖型腺病毒WAd5/35以及包含8个拷贝“种子”序列突变后的miR-199a/b-3p靶序列的溶瘤腺病毒SG7035199MT则能在Hep3B、Huh7、L02、SK-OV3中均能有效增殖并发挥杀伤作用。体内方面，SG7035199T能有效抑制Hep3B移植瘤的生长，其抑瘤能力与WAd5/35、SG7035199MT相当；对于SK-OV3移植瘤，SG7035199T基本无抑制作用，而对照病毒WAd5/35、SG7035199MT能有效抑制移植瘤的生长。综上所述，SG7035199T能特异杀伤肝癌细胞，而对正常肝细胞基本无毒性，是一种较为理想的靶向肝癌细胞的溶瘤腺病毒系统。