掺假原料乳快速检测试纸条的研究

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针对掺假原料乳现有检测方法的不足,研究制备适用于掺假原料乳快速检测的免疫胶体金层析试纸条。首先,成功制备了原料乳中两种特征性酪蛋白αs-酪蛋白和κ-酪蛋白的多克隆抗体,然后,采用微波加热方法制备单分散性好的高质量胶体金溶液,鉴定质量后标记κ-酪蛋白多克隆抗体。最后,将金标κ-酪蛋白多克隆抗体喷涂在聚酯膜上,κ-酪蛋白纯品和羊抗兔IgG包被在硝酸纤维素膜上,制成快速检测试纸条。αs-酪蛋白和κ-酪蛋白的多克隆抗体质量评价时效价和特异性的测定均采用酶联免疫吸附测定法,抗血清的纯化采用硫酸铵沉淀法。纯化后的αs-酪蛋白和κ-酪蛋白的多克隆抗体可以用于胶体金的标记。制备胶体金时,对比了不同加热方式、不同的加热时间和还原剂用量对胶体金制备的影响。结果表明:微波法更适于制备胶体金,所制备的胶体金单分散性好、粒径小,并且用时短。研究了不同的胶体金标记κ-酪蛋白抗体的标记条件(标记时pH值和最小κ-酪蛋白抗体浓度)、聚酯膜上金标抗体的喷涂量、κ-酪蛋白纯品和羊抗兔IgG的包被浓度等对检测结果的影响,确定了最佳条件,成功制备了κ-酪蛋白的免疫胶体金层析试纸条。针对样品中被检物质含量较高的情况,采用稀释样品的方法进行了大胆的尝试。检测了κ-酪蛋白的免疫胶体金层析试纸条的各项性能,并与ELISA方法和电化学免疫传感器检测方法进行了对比。本研究对掺假原料乳快速检测方法的研究具有借鉴意义。
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