论文部分内容阅读
恶性肿瘤的发生、发展、转移通常是多个相关基因发生改变的过程。在过去的几十年里，科学家们的研究重点通常集中在编码蛋白的基因上。近年来新发现的一类内源性的非编码微RNA(microRNA，miRNA)引起了研究人员的极大兴趣，从此开辟了肿瘤研究的新领域。miRNA长度只有22个核苷酸左右，不编码蛋白，但能够在转录后水平通过和信使RNA(mRNA)的结合，抑制mRNA的翻译或者直接裂解mRNA，从而沉默编码基因的表达。一种miRNA可调控多个相关靶基因的表达，因此其能够高效而协调地调控编码基因的表达。目前的研究显示miRNA可能在肿瘤的发生发展中起着关键的调控作用，miRNA可以通过抑制编码癌基因的表达起到抑癌的作用，也可以通过抑制抑癌基因的表达起到促癌的作用。
研究发现miRNA-21(miR-21)在多种实体瘤中表达上调，如胃癌，肺癌，肝癌，乳腺癌等。这就意味着miR-21起着致癌的作用，它的靶基因应该是抑癌基因。目前已经有实验证实，在肝细胞肝癌(HCC)中，人类肿瘤中最常见缺失的抑癌基因之一第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)是miR-21的靶基因之一。而PTEN亦在多种实体肿瘤中表达下调。有证据表明PTEN的失表达和乳腺癌的淋巴结转移，肿瘤级别，TNM分期，激素状态及微血管密度等相关，而且还可以作为乳腺癌的一个预后指标。但在乳腺癌中miR-21是否能下调PTEN目前还不清楚。
此外，在体外细胞株以及移植瘤动物模型的实验中发现miR-21和肿瘤细胞的凋亡，肿瘤生长及肿瘤细胞对化疗药物的敏感性有关。但miR-21在人乳腺癌组织中的表达及其临床意义研究甚少，因此本课题通过基于SYBR GreenⅠ染料荧光分析的Realtime RT-PCR方法检测人乳腺浸润性导管癌中miR-21的表达，探讨其与抑癌基因PTEN表达的相关性，以及与乳腺癌的临床病理特征的联系，进一步研究miR-21在乳腺癌发生发展中可能的作用及其临床意义。该研究所采用的方法比常用的基于TaqMan探针荧光分析的Realtime PCR成本低，但仍具有灵敏度高及特异性好的优点。
目的：
探讨miR-21和PTEN在乳腺浸润性导管癌中的表达情况及其临床意义。
方法：
采用基于SYBR GreenⅠ染料荧光分析的茎环Realtime RT-PCR检测40例乳腺浸润性导管癌及其对应的正常乳腺组织中miR-21的表达，免疫组化Envision二步法检测相应癌组织中PTEN的表达，分析miR-21表达和PTEN表达的相关性及临床分期、淋巴结转移、增殖指数等临床病理特征的关系。
结果：
1.基于SYBR GreenⅠ染料荧光分析的茎环Realtime RT-PCR方法检测miR-21表达的特异性良好。
2.miR-21在乳腺癌组织中的相对表达值(2-△△Ct)的中位数为5.770，在配对的正常乳腺组织中的相对表达值中位数为1.000。两者的差异具有显著性(P<0.001)。
3.PTEN在癌组织中的低表达率为45％(18/40)；在PTEN低表达组，miR-21的相对表达值中位数为6.800，在PTEN高表达组，miR-21的相对表达值中位数为4.850，两者有显著性差异(P=0.013)。
4.miR-21的表达与乳腺癌的TNM分期、淋巴结转移及增殖指数相关，在高TNM分期组miR-21的表达升高(中位数分别为：Ⅰ期3.870，Ⅱ期6.215，Ⅲ期6.920，P=0.021)，在有淋巴结转移组miR-21表达升高(中位数分别为：淋巴结阳性组6.710，淋巴结阴性组4.660，P=0.010)。高增殖指数组miR-21的表达升高(中位数分别为：高增殖指数组6.420，低增殖指数组4.630，P=0.030)。
结论：
miR-21在乳腺浸润性导管癌中表达升高，可能与乳腺癌的增殖、侵袭转移有关，有望成为乳腺癌新的预后指标及治疗靶点；在乳腺癌中PTEN可能为其靶基因之一。