【摘 要】
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大白菜（Brassica rapa ssp.pekinensis）是十字花科植物中一种重要的蔬菜,因其产量高和营养丰富等特点深受大众喜爱,在我国大部分地方都有种植。在培育抗病优质高产品种的过程中发现大白菜有些材料的种子成熟前会出现提前萌发的现象,影响种子的品质,降低经济效应,因此明确大白菜种子胎萌性状的调控机理具有重要意义。本试验以胎萌材料8407和不胎萌材料72M为亲本构建F2代群体,利用BSA
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大白菜（Brassica rapa ssp.pekinensis）是十字花科植物中一种重要的蔬菜,因其产量高和营养丰富等特点深受大众喜爱,在我国大部分地方都有种植。在培育抗病优质高产品种的过程中发现大白菜有些材料的种子成熟前会出现提前萌发的现象,影响种子的品质,降低经济效应,因此明确大白菜种子胎萌性状的调控机理具有重要意义。本试验以胎萌材料8407和不胎萌材料72M为亲本构建F2代群体,利用BSA-seq和QTL定位结合的研究方法确定候选区域,同时结合实验室前期的转录组测序数据分析,对候选区间内的基因进行挖掘,主要结果如下:1.对构建的极端混合池和亲本池进行BSA测序,亲本池和子代池共获得原始数据60.23G,过滤后得到有效数据55.96G,经测序数据与大白菜基因组blast分析,四个样本池的比对率均达到88%以上。结合ΔSNP-index和ΔIn Del-index分析,将候选区域确定于3号染色体上,大小为2.5Mb,共包含436个基因。2.根据BSA测序的结果,在候选区间内筛选In Del位点和SNP差异位点并设计引物,利用具有多态性的15条In Del引物和6条d CAPs引物对包含114个单株的F2群体构建遗传图谱并进行QTL定位,图谱全长178.55c M,平均遗传距离为5.25 c M。结合田间单株胎萌率数据,将候选区间缩小到In Del-24和In Del-8两对分子标记之间,其间的遗传距离为7.73c M,物理距离为796kb。3.对实验室前期的转录组测序数据分析,发现共有13319个差异表达基因,其中有2925个表达上调和9823个表达下调。对差异表达基因进行筛选和功能注释分析,筛选到一些与种子休眠与萌发相关的基因,包括种皮类黄酮合成相关基因、胚胎发育相关基因、ABA合成及调控相关基因、GA调控基因和JA合成相关基因等。4.结合转录组差异表达基因和候选区间内基因的功能注释,预测到两个候选基因Bra013201和Bra012635,其CDS序列分别为615bp和576bp,它们分别注释到拟南芥的IBR5和PYR1两个参与ABA调控的基因。利用同源重组的方法构建了带有GFP标签的过表达载体,在烟草上瞬时表达发现,这两个基因主要位于细胞质和细胞核中。
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